畜牧兽医学报

作者：乔岩, 赵家富, 常潇天, 陈征, 韩莹倩, 张超

单位：河南农业大学动物医学院，农业农村部动物生化与营养重点开放实验室，郑州 450046

关键词：伪狂犬病病毒,Nectin1,SELEX,DNA适配体,病毒吸附阻断

基金：河南省自然科学基金(252300420197);国家自然科学基金(31972672)

本研究旨在可溶性原核表达伪狂犬病病毒（PRV）受体Nectin1蛋白的N端胞外结构域，并以此为靶标，筛选出高亲和力、高特异性的DNA适配体，为阻断伪狂犬病病毒吸附宿主细胞提供新的分子工具。将猪源Nectin1基因克隆至带有麦芽糖结合蛋白（MBP）促溶标签的原核表达载体pET28a中，构建重组质粒pET28a-MBP-Nectin1，将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，使用Western blot和Pull-down试验验证重组蛋白。采用基于磁珠偶联的系统进化适配体筛选技术（SELEX）筛选特异性靶向rMBP-Nectin1的DNA适配体，并利用磁珠ELASA检测筛选所得适配体Apt-Nectin1-6的亲和力与特异性。以敲减Nectin1蛋白的细胞系（sh-Nectin1-1、sh-Nectin1-2）为对照，应用流式细胞术验证Apt-Nectin1-6对细胞表面Nectin1蛋白的结合能力，同时通过流式细胞术和基因组拷贝数试验评估其对PRV吸附细胞的抑制作用。Western blot和Pull-down结果表明重组MBP-Nectin1蛋白正确表达且具有生物学活性。通过SELEX技术筛选获得的适配体Apt-Nectin1-6对rMBP-Nectin1具有高亲和力，平衡解离常数（Kd）为（0.11±0.02） nmol，且不与rMBP-gD、rMBP-S1、rMBP-CD163及rMBP蛋白发生交叉反应。分子对接结果显示，Apt-Nectin1-6通过氢键与Nectin1结合。进一步流式细胞术、基因组拷贝数检测和病毒滴度测定结果显示，Apt-Nectin1-6可剂量依赖性地抑制PRV对细胞的吸附（P<0.05）。本研究成功筛选得到可高特异性、高亲和力结合Nectin1蛋白的DNA适配体Apt-Nectin1-6，并证实其可有效阻断PRV对细胞的吸附，为开发新的抗PRV策略奠定基础。

来源：2026年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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