畜牧兽医学报

作者：郭震楠, 吕世政, 萧宗贤, 吴启吉, 包雨加, 李清, 李齐发, 李琦琦, 杜星

单位：1.南京农业大学动物科技学院，南京 210095；2.江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院，镇江 212400

关键词：猪,卵泡颗粒细胞,氧化应激,miRNA,KLF5

基金：国家自然科学基金(32372839);江苏省自然科学基金(BK20231475)

旨在探究猪卵泡颗粒细胞中miR-370和miR-219a响应氧化应激的表达模式及调控机制，为研发内源性小分子调节物抑制氧化应激、促进卵泡发育提供理论依据。本研究以原代猪卵泡颗粒细胞为试验材料，利用150 μmol·L-1 H2O2构建体外氧化应激模型。结合RNA-seq与RT-qPCR试验明确氧化应激对miR-370和miR-219a转录的调控作用。基于生物信息学分析和组织表达谱构建鉴定二者保守性和组织表达分布。利用FACS和ELISA试验鉴定二者对颗粒细胞氧化应激和凋亡的影响。构建猪KLF5表达载体，通过WB试验鉴定表达效率，进一步结合RT-qPCR、荧光素酶活性检测和ChIP等试验鉴定KLF5抑制氧化应激状态下颗粒细胞中miR-370和miR-219a转录的机制。结果表明，氧化应激抑制miR-370和miR-219a转录，导致二者初体、前体和成熟表达水平均极显著下调（P<0.01）。特征分析发现二者高度保守且在卵巢组织高表达。相关性分析发现二者表达水平与SOD活性呈极显著正相关（P<0.01），与MDA水平呈极显著负相关（P<0.01），提示二者具有抗氧化功能。过表达二者可有效缓解氧化应激引起的ROS累积、低SOD活性、高MDA水平和高凋亡率，且二者功能存在协同效应。预测发现二者启动子区存在转录因子KLF5结合位点，过表达KLF5极显著抑制二者转录和启动子活性（P<0.01），但对结合位点突变型报告载体的荧光素酶活性并无显著影响。进一步通过ChIP证实KLF5与二者启动子区直接结合，且氧化应激可提高其结合丰度。综上所述，氧化应激通过促进KLF5的表达与转录因子活性抑制具有抗氧化功能的miR-370和miR-219a转录，加剧颗粒细胞氧化损伤。

来源：2026年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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