畜牧兽医学报

作者：朱薇, 仇汝龙, 陈萌萌, 胡波, 魏后军, 范志宇, 葛雷, 伍孟婷, 宋艳华, 王芳

单位：1.南京农业大学动物医学院，南京 210095；2.江苏省农业科学院兽医研究所，南京 210014；3.农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，南京 210014；4.兽用生物制品泰州国泰技术创新中心，泰州 225300

关键词：兔出血症病毒,RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）,间接ELISA

基金：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-43-C-1)

为建立区别兔出血症病毒（RHDV）感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法，本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白，成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白，并以RdRp蛋白作为包被抗原，建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示，经纯化和酶切后，获得不含标签蛋白的RdRp蛋白，约为57 ku。经Western blot验证，2种RdRp蛋白均与RHDV1 或RHDV2感染血清发生特异性反应且无型别间差异。因此，选择RHDV2-RdRp作为包被抗原，包被浓度为2.5 μg·mL-1；最佳血清稀释度为1∶100，孵育时间为37 ℃ 60 min；酶标抗体的最佳稀释度为1∶10 000；临界值为0.225。经验证，该ELISA方法具有较好的特异性和敏感性；其批内、批间重复性试验变异系数均小于10%，具有较好的稳定性。通过对RHDV攻毒后样本及基因工程疫苗免疫后血清样本进行检测。结果显示，RHDV感染后可以诱导机体产生针对RdRp蛋白的血清抗体，而基因工程疫苗免疫后血清检测为阴性。本研究基于RHDV-RdRp蛋白所建立的ELISA方法可以对基因工程疫苗免疫和RHDV感染进行区分，为筛查RHDV的临床感染提供有效的检测方法。

来源：2026年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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