畜牧兽医学报

作者：苏大崴, 陈秋崇, 苗洱钰, 张骐镜, 陈哲, 王小龙, 徐坤

单位：西北农林科技大学动物科技学院, 农业农村部动物生物育种国际联合研究中心, 陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室, 杨凌 712100

关键词：CPRISPR/Cas12i,同源重组,绵羊,Indels,基因敲入

基金：农业科技重大专项；农业生物育种重大专项(2023ZD04074；2023ZD04051)

旨在以绵羊原代细胞为材料，验证CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因编辑效率，以及5种小分子药物对Indels效率和敲入效率的影响。本研究以两种绵羊原代细胞为试验对象，验证CRISPR/Cas12i系统在25个靶基因位点的基因编辑效率；然后选取绵羊胎儿成纤维细胞的3个靶点(SOCS2-gRNA1、SOCS2-gRNA3和TBXT-gRNA5)，绵羊后腿肌细胞的5个靶点(MSTN-gRNA2、MSTN-gRNA5、Myf6-gRNA4、Myf6-gRNA5和MyoG-gRNA4)检测5种小分子药物(SCR7、Nocodazole、RS-1、Vorinostat及Entinostat)对各靶点Indels效率的影响，最后在MSTN-gRNA2靶点检测5种小分子药物对CRISPR/Cas12i系统介导的以ssODN为供体进行HDR精准修复的基因敲入效率的影响。本研究验证了CRISPR/Cas12i系统在两种绵羊原代细胞的25个不同靶点均具有高基因编辑活性，添加小分子药物处理后，SCR7会降低绵羊原代细胞各靶点Indels效率，而RS-1、Entinostat和Vorinostat处理后对各位点Indels效率均有提升效果，Nocodazole对两种细胞作用效果不一致。在添加5种小分子药物处理后，MSTN-gRNA2位点敲入效率均有不同程度提高，其中2 μmol·L-1 Vorinostat和4 μmol·L-1 Entinostat处理组提升效果最高，敲入效率分别为7.67%和7.73%。该试验为CRISPR/Cas12i基因编辑系统的应用与推广提供了借鉴，为创制具有优良性状的基因编辑绵羊提供了新思路，为加速精准分子育种工作提供了技术支撑。

来源：2025年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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