畜牧兽医学报

作者：郑雪莹, 王培, 孙伟珊, 赵浩军, 殷雨晴, 李佳, 程汝佳, 刘海莹, 王大猛, 穆伟, 李达, 陈锡俊, 郑博君, 梅力

单位：1. 北京市动物疫病预防控制中心, 北京 102629；2. 北京测易生物科技有限公司, 北京 102629

关键词：A型口蹄疫病毒,铁蛋白,CLIA,磁微粒化学发光,纳米颗粒

基金：北京市动物疫病预防控制中心综合保障项目(实验室运转与动物疫病监测)(11000024Y000002861241)

本研究旨在制备A型口蹄疫病毒(FMDV-A)多表位纳米融合蛋白并建立磁微粒CLIA抗体检测方法，为FMDV的临床监测和防控提供技术支撑。以表达的FMDV-A型多表位融合蛋白及其多克隆抗体为基础建立FMDV-A型磁微粒CLIA抗体检测方法，优化反应条件，并与商品化试剂盒同时进行临床样品的检测，比较两种方法的符合率。结果显示：本研究最终成功制备了高可溶性FMDV-A型多表位纳米融合蛋白及其特异性多克隆抗体，多克隆抗体效价为1∶5 120，并根据竞争法免疫原理建立了FMDV-A型磁微粒CLIA抗体检测方法。SA-Beads最佳浓度为0.5 mg·mL-1，生物素标记的FMDV-A型重组蛋白抗原最佳工作浓度为5 μg·L-1，AE标记的多克隆抗体最佳工作浓度为2 μg·L-1；最佳上样体积为10 μL，最佳反应时间为15 min。敏感性试验结果表明，该方法的敏感性为97.47%，敏感性好。特异性试验结果表明，与其他相似病原没有交叉反应，特异性强。重复性试验结果说明变异系数CV值均小于5%，具有良好的稳定性和重复性。临床试验结果表明，与中国农科院兰州兽医研究所LPB-ELISA方法比较，总符合率为96.76%，为国内FMDV-A的研究与快速诊断建立了技术基础。本研究成功制备FMDV-A型毒株的VP1多表位融合纳米颗粒蛋白，并获得其高效价多克隆抗体，应用该蛋白和多克隆抗体建立了FMDV-A型磁微粒CLIA抗体检测方法。

来源：2025年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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