畜牧兽医学报

作者：王红梅, 周婉怡, 罗鑫杰, 陈荟琳, 陈钦玺, 舒雪利, 张金玉, 苏桐, 廖明, 曹伟胜

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642；2. 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室, 广州 510642；3. 人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室, 广州 510642；4. 农业农村部兽用疫苗创制重点实验室, 广州 510642；5. 农业农村部人兽共患病重点实验室, 广州 510642

关键词：J亚群禽白血病病毒,K亚群禽白血病病毒,qPCR,核酸筛查,混样检测

基金：广东省家禽产业技术体系(2023KJ128；2024CXTD20)；国家肉鸡产业技术体系(CARS-41)

为了缩短J、K亚群禽白血病病毒(subgroup J/K avian leukosis virus, ALV-J/K)净化检测周期，加快禽白血病(avian leukosis，AL)净化进程，本研究建立了一种适用于ALV-J/K低流行率场景下的血液核酸快速筛查技术(ALV-J/K blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J/K-B-qPCR)。选取ALV-J、ALV-K保守区域设计特异性引物和TaqMan探针，并优化反应条件，建立了ALV-J/K TaqMan qPCR方法。以细胞病毒分离鉴定为ALV-J/K的阳性血液为实验材料，制备抗凝血DNA、血细胞DNA和血浆cDNA，进行ALV-J/K TaqMan qPCR检测，筛选最佳检测模板；使用血液室温裂解试剂盒和通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸，筛选核酸提取方法；探索阳性样品不同稀释倍数对检测结果的影响，评估混合样本检测的可行性。运用ALV-J/K-B-qPCR进行预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验，并与病毒分离法比较。结果显示：ALV-J/K TaqMan qPCR特异性、灵敏性和重复性试验结果显示，该方法仅能特异性扩增ALV-J和ALV-K，对阳性标准品的检测下限分别为8.95×101 copies·μL-1、8.16×101 copies·μL-1，比普通PCR灵敏性高100倍，批内和批间变异系数均＜2%。96份临床样本检测结果显示，ALV-J/K TaqMan qPCR检出率为21.9%，高于普通PCR(15.6%)和ALV p27 ELISA(18.8%)。检测模板筛选试验中，抗凝血DNA为最佳检测模板。核酸提取方法筛选试验中，通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸检测效果最好。混合样本检测可行性评估试验中，本研究建立的检测方法混合样本数量＜10时，可检测低病毒载量样本。预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验结果显示，ALV-J/K-B-qPCR检出率为4%，比病毒分离法高2.5%。本研究建立的ALV-J/K-B-qPCR技术具有同时检测并鉴别ALV-J和ALV-K、检测效率高和节约成本的优势，以期为种禽场AL净化提供新技术。

来源：2025年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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