畜牧兽医学报

作者：邓梦玲, 隋敏敏, 宋海洋, 杨建发, 邹丰才, 贺君君

单位：1. 云南农业大学动物科学技术学院, 昆明 650201；2. 云南农业职业技术学院畜牧兽医学院, 昆明 650201；3. 温州科技职业学院动物科学学院, 温州 325000；4. 云南农业大学动物医学院, 昆明 650201

关键词：基质金属蛋白酶7,慢病毒,稳定过表达,DF-1细胞系

基金：NSFC-云南省联合基金项目(U2202201)；云南省家畜疫病病原生物学重点实验室(202449ce340019)；云南省教育厅科学研究基金项目(2025j1508)；云南省国际科技特派员项目(202403ak140036)

旨在构建稳定过表达鸡mmp7基因的DF-1细胞系，为细胞水平研究mmp7基因在相关疾病中的功能奠定基础。合成鸡mmp7基因序列，构建重组慢病毒质粒pLVX-MMP7-IRES-puro，利用三质粒慢病毒包装系统，将pLVX-MMP7-puro与辅助质粒pCMV-VSV-G、psPAX2共转染至对数生长期的293T细胞，获得携带mmp7基因序列的重组慢病毒，重组慢病毒感染DF-1细胞72 h后, 使用含1.5 μg·mL-1嘌呤霉素的筛选，通过PCR验证mmp7基因在DF-1细胞基因组中的整合情况，RT-PCR检测mmp7基因的转录水平，以及Western blot分析MMP7蛋白的表达水平，以鉴定是否成功获得稳定过表达鸡MMP7的DF-1细胞系，并使用CCK-8试验评估过表达MMP7对DF-1细胞增殖的影响。本研究成功构建了稳定过表达鸡MMP7的DF-1细胞系，过表达MMP7在24~48 h对细胞活力无明显影响，但120~144 h后细胞活力显著降低(P < 0.05)。该细胞系的构建为后续深入探究MMP7的生物学功能提供了重要工具。

来源：2025年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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