畜牧兽医学报

作者：任文浩, 姚梦欣, 张乾艺, 徐艺玫, 郭伟, 陈创夫, 马忠臣, 王勇

单位：1. 石河子大学动物科技学院, 石河子 832000；2. 动物健康养殖国际联合研究中心, 石河子 832000；3. 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心, 乌鲁木齐 830000；4. 福建圣维生物科技有限公司, 南平 350000

关键词：布鲁氏菌,BtpA蛋白,亚单位疫苗,保护效果,ELISpot

基金：新疆维吾尔自治区“天池英才(青年博士)”计划；国家自然科学基金(32060789)

旨在研究布鲁氏菌抗原btpA的免疫原性和对小鼠的免疫保护效果。试验通过PCR扩增布鲁氏菌btpA基因，克隆到pET-22b原核表达载体中，获得重组质粒pET-22b-BtpA，双酶切鉴定后在E.coli BL21(DE3)中用IPTG诱导目的蛋白表达并纯化后通过SDS-PAGE与Western blot鉴定。腹腔注射100 μg·只-1 rbtpA蛋白到6周龄SPF级BALB/c小鼠中，14 d以50 μg·只-1加强免疫。分别在7 d、14 d、21 d和28 d对小鼠尾部静脉采血。对小鼠血清中的布鲁氏菌特异性IgG抗体和抗体亚型(IgG1和IgG2a)使用间接ELISA进行检测。使用ELISpot方法检测在小鼠脾中释放IFN-γ的淋巴细胞数量。免疫28 d攻毒布鲁氏菌流行株(含2×105 CFU·只-1)，15 d后剖检，根据小鼠脾中的布鲁氏菌载菌量评价亚单位疫苗的保护效力。结果表明，获得30 ku纯化的重组BtpA蛋白(rBtpA)；rBtpA免疫7 d后小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体，28 d水平最高，而PBS组未检测到特异性抗体；rBtpA免疫小鼠14 d和28 d后IgG2a/IgG1值都大于1，28 d更加显著，说明rBtpA诱导小鼠产生Th1偏向型的免疫应答反应。28 d内，小鼠释放IFN-γ的脾淋巴细胞数量明显超过PBS对照组，表明在rBtpA免疫后小鼠可以产生较高水平的Th1型细胞免疫应答反应。rBtpA组小鼠脾指数SI显著低于PBS组(P < 0.001)，脾载菌量也显著低于PBS组(P < 0.01)，表明rBtpA亚单位疫苗组的小鼠脾脏指数和脾载菌量更低。上述研究证明，rBtpA亚单位疫苗有作为布鲁氏菌病候选疫苗的潜质，本试验位研发布鲁氏菌rBtpA亚单位疫苗奠定了基础。

来源：2025年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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