畜牧兽医学报

作者：马月, 苗宇航, 丁涛, 辛杰, 马文妍, 李雅楠, 周学章, 杜军

单位：1. 宁夏大学生命科学学院, 银川 750021；2. 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室, 银川 750021

关键词：重组克柔念珠菌14-3-3蛋白,奶牛乳腺上皮细胞,核因子E2相关因子2-溶质载体家族7A11/GPX4信号通路,铁死亡

基金：2024年大学生创新创业训练计划国家级推荐项目(G202410749023)；宁夏自然科学基金项目(2024AAC03118)；国家自然科学基金(32160044)

旨在研究重组克柔念珠菌14-3-3(rCK14-3-3)蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)铁死亡的特征，为揭示克柔念珠菌毒力因子损伤奶牛乳腺上皮细胞的机制提供理论依据。采用CCK-8法筛选rCK14-3-3蛋白对MAC-T的最适作用浓度和时间；将奶牛乳腺上皮细胞分为空白对照组、阳性对照组(10 μmol·L-1 Erastin)、试验组Ⅰ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75 μg·mL-1))、试验组Ⅱ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75 μg·mL-1)+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(20 μmol·L-1))、试验组Ⅲ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75 μg·mL-1)+Nrf2特异性抑制剂ML385(25 μmol·L-1))，透射电镜检测细胞铁死亡形态学特征；Western blot检测rCK14-3-3诱导MAC-T铁死亡Nrf2-SLC7A11/GPX4信号通路蛋白表达水平；免疫荧光法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(JC-1)的表达水平；比色法检测MAC-T中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe2+)的含量。结果发现，与空白对照组相比，阳性对照组、试验组Ⅰ出现明显铁死亡特征；阳性对照组、试验组Ⅰ Nrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著下降(P < 0.05)，ROS、MDA、Fe2+含量显著上升，JC-1含量显著下降(P < 0.05)，而与试验组Ⅰ相比，试验组Ⅱ Nrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著上升(P < 0.05)，ROS、MDA、Fe2+含量显著下降，JC-1含量显著上升(P < 0.05)；试验组Ⅲ Nrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著下调(P < 0.05)，ROS、MDA、Fe2+含量显著上升，JC-1含量显著下降(P < 0.05)。本研究表明，rCK14-3-3蛋白可通过Nrf2-SLC7A11/GPX4信号通路诱导MAC-T发生铁死亡，为今后靶向干预铁死亡防治念珠菌性奶牛乳房炎提供了数据支持。

来源：2025年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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