畜牧兽医学报

作者：曹秋霞, 颜可欣, 程振孔, 卞贤宇, 王传红, 李素芬, 张雪寒, 范宝超, 郭容利, 杨珊珊, 王晓杜, 李彬

单位：1. 浙江农林大学动物医学院, 杭州 311300；2. 江苏省农业科学院兽医研究所, 南京 210014

关键词：CCL25,原核表达,蛋白纯化,功能鉴定,多克隆抗体

基金：国家重点研发计划项目(2023YFD1800302)；江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(24)3071)；江苏省基础研究专项资金(BK20241180)；河北省省级科技计划资助(21322401D)；国家自然科学基金项目(32402904)

本研究旨在表达鉴定重组猪源细胞因子CCL25蛋白功能及制备针对CCL25的兔源多克隆抗体。获取去除跨膜区的CCL25氨基酸序列，构建重组载体并在大肠杆菌表达系统中表达，镍柱纯化后利用SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定蛋白表达；利用细胞增殖、划痕试验、Transwell培养等试验，通过流式细胞术、实时荧光定量等技术验证蛋白生物活性。蛋白采用皮下多点注射方法免疫新西兰大白兔，制备兔多克隆抗体。通过间接ELISA、共聚焦及Western blot验证多克隆抗体的功能与效价。结果显示：SDS-PAGE、Western blot证实蛋白可溶性表达，细胞增殖、划痕试验、Transwell培养等试验结果显示，CCL25促进IPEC-J2细胞生长，使其向空白区域迁移，上调细胞AKT和p-AKT473表达量，并明显促进猪外周血淋巴细胞的细胞趋化。同时，CCL25抑制LPS诱导的IL-8、caspase-3表达以及7-AAD+死亡细胞比例。除此之外，本研究成功制备出效价高、特异性良好的多克隆抗体。原核表达纯化获得CCL25蛋白并初步鉴定CCL25蛋白具有促进细胞增殖、迁移、趋化以及抗炎抗凋亡等生物学功能，为CCL25的后续功能研究提供了有效的实验工具和基础数据。

来源：2025年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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