畜牧兽医学报

作者：贺艳艳, 陈凌波, 魏甜, 滕志东, 张韵, 张铭洋, 马文倩, 敬晓棋, 郭慧琛, 穆素雨, 孙世琪

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730030；2. 榆林学院现代农学院, 榆林 719000

关键词：5BCD40L,口蹄疫,免疫效果

基金：甘肃省科技重大专项(24ZDWA004)；宁夏重点研发计划(2024BBF02017)；中国博士后面上项目(2024M763620)

旨在评价猪可溶性CD40L三聚体蛋白对口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)疫苗的免疫增强效果。本研究将含猪CD40配体(CD40L)三聚体(5B CD40L)基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，纯化的重组5B CD40L蛋白偶联FITC后与PBMCs进行反应，使用荧光显微镜研究CD40L蛋白与单核细胞反应的生物活性。进一步将5B CD40L、VLPs和5B CD40L-VLPs免疫豚鼠，通过检测中和抗体、脾淋巴细胞增殖以及实时RT-qPCR评估5B CD40L对VLPs疫苗免疫效果的影响。SDS-PAGE和Western blot结果显示，表达的重组5B CD40L蛋白大小约32 ku，确定最佳表达条件为16 ℃、OD600 nm值为0.9、0.5 mmol L-1浓度IPTG诱导12 h；流式细胞仪分析表明，重组CD40L蛋白能与猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)表面的CD40蛋白分子结合。5B CD40L联合VLPs可以加速特异性抗体及中和抗体反应，提高脾淋巴细胞增殖水平，并且在5B CD40L-VLPs组中，脾脏细胞的IL-2和INF-γ mRNA显著高于VLPs组。综上所述，5B CD40L具有增强FMD VLPs疫苗体液免疫应答和细胞免疫应答的能力，具有作为疫苗佐剂的潜力。

来源：2025年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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