畜牧兽医学报

作者：曹恒志, 马芊玥, 姜艳平, 崔文, 李佳璇, 乔薪瑗

单位：东北农业大学动物医学学院，黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制实验室，哈尔滨 150030

关键词：牛嵴病毒,结构蛋白,单克隆抗体,双抗体夹心ELISA

基金：黑龙江省重点研发计划项目(GA21B004)

本研究旨在制备牛嵴病毒(bovine kobuvirus, BKV)单克隆抗体，并建立一种双抗体夹心ELISA检测方法。利用pET-30a(+)载体，原核表达BKV结构蛋白VP0，VP3和VP1，纯化后分别免疫BALB/c小鼠，三次免疫后分离小鼠脾细胞，与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞，通过间接ELISA方法筛选，以制备的单克隆抗体为捕获抗体和检测抗体，优化抗体浓度和孵育时间等条件，建立特异性检测BKV的双抗体夹心ELISA方法。结果显示：获得2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为2A12和5E11，均为抗VP1蛋白抗体；叠加ELISA及抗体可变区序列分析结果表明，其识别不同的抗原位点；单抗特异性检测结果显示，2株单抗特异性结合BKV，不与其它牛腹泻病毒结合；分别用RT-PCR方法和本研究建立的双抗体夹心ELISA方法，对107份临床样品进行检测，结果显示双抗体夹心ELISA方法与RT-PCR方法的阳性符合率为92.2%，阴性符合率为95.3%，总符合率为93.5%。综上，本研究制备了2株BKV单克隆抗体，并建立BKV的双抗体夹心ELISA方法，该方法特异性、重复性和敏感性良好，为BKV的快速诊断与防控奠定了基础。

来源：2025年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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