畜牧兽医学报

作者：吴婷婷, 关飞虎, 郭嘉, 张璐, 朱德馨, 孙志华, 曹树珠, 徐艺玫, 张辉, 邓兴梅

单位：1. 石河子大学动物科技学院，石河子 832000；2. 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830002

关键词：布鲁氏菌分泌蛋白,GPR126表达,基因缺失

基金：2023年石河子大学高层次科研启动项目(RCZK202358)；国家自然科学基金项目(32372973)；新疆维吾尔自治区“天池英才”引进计划

布鲁氏菌T4SS分泌蛋白参与布鲁氏菌引起的母畜流产及胎盘炎症反应，为探究布鲁氏菌分泌蛋白致流产机制，本研究构建布鲁氏菌BPE005缺失株，初步探究分泌蛋白BPE005对胚胎发育关键蛋白GPR126的影响。本试验以Kan基因替换目的基因的同源重组方法，构建BPE005缺失株S2308ΔBPE005，连续培养15代，检测其遗传稳定性；同时构建并电转pBBR1MCS-4-BPE005质粒至BPE005缺失株S2308ΔBPE005中，成功构建BPE005回补株S2308▲BPE005。每4 h检测S2308、S2308△BPE005、S2308▲BPE005菌株的OD600 nm，并根据时间和OD600 nm绘制各菌株的生长曲线。以感染复数(MOI)100，建立S2308、S2308ΔBPE005、S2308▲BPE005菌株侵染滋养层细胞HTR-8模型，通过平板计数方法检测3株菌株胞内生存情况；分别收集侵染后0、4、8、12 h滋养层细胞中的蛋白样和RNA样，通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法检测GPR126蛋白表达量。结果显示：本试验成功构建布鲁氏菌分泌蛋白BPE005缺失株和回补株，并且能稳定遗传15代。生长曲线结果显示，与S2308相比，缺失布鲁氏菌分泌蛋白BPE005菌株在12~44 h生长活力都降低，其中，24~44 h平台期时均显著降低(P < 0.001)，但回补株与野生株无显著差异(P>0.05)；胞内生存试验结果表明，与S2308相比，S2308ΔBPE005在HTR-8细胞内存活数量下降，在侵染后12和24 h时显著下降(P < 0.001)。实时荧光定量和蛋白免疫印迹结果表明，与对照组相比，S2308菌株在侵染4 h后，会引起GPR126蛋白表达量的显著升高(P < 0.001)，随后开始下降；与S2308菌株相比，S2308ΔBPE005菌株在侵染后4 h时，GPR126蛋白表达量显著降低(P < 0.001)，而8 h时，GPR126蛋白的显著升高(P < 0.001)，S2308▲BPE005与S2308无显著差异。本试验成功构建稳定遗传的布鲁氏菌分泌蛋白BPE005缺失株和回补株，布鲁氏菌分泌蛋白BPE005能促进布鲁氏菌繁殖，促进布鲁氏菌胞内增殖；BPE005缺失株感染初期抑制GPR126蛋白表达，但中期能促进GPR126的表达。本研究结果为布鲁氏菌分泌蛋白对GPR126蛋白相互作用的影响，以及布鲁氏菌在滋养层细胞中致病机制奠定基础和提供思路。

来源：2025年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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