畜牧兽医学报

作者：雷伊诺, 赵慧玉, 幸倩如, 许国顺, 张广智, 张珊, 蒋卉, 沈青春, 丁家波, 韦英益, 范学政

单位：1. 广西大学动物科学技术学院/广西畜禽繁育与疫病防控重点实验室，南宁 530004；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；3. 山东农业大学，泰安 271000

关键词：腐败梭菌α毒素,MPEPE,毒力,可溶性,免疫原性

基金：宁夏重点研发项目(2024BBF02014)；广西重点研发计划(桂农科AB241484045)；中国农科院创新工程重点项目(CAAS-CSLPDCP-202403)

本研究旨在获得可溶性、免疫原性好的腐败梭菌α毒素突变体。通过MPEPE预测工具对α毒素蛋白进行点突变预测，构建表达载体在大肠杆菌中表达验证，比较rCsa各突变体的可溶性、毒性和小鼠免疫原性。结果表明，rCsa突变体在大肠杆菌中正确表达，条带大小均为约47 ku。rCsaS398D、rCsaK405M、rCsaN397D在大肠杆菌细胞裂解上清中分别占表达总蛋白的9.5%、9.4%、10.5%，在裂解上清与沉淀中的表达量之比分别为2.5、2.6、2.9，rCsaN397D可溶性表达量最高；小鼠毒性试验结果显示3个rCsa突变体毒性均未丢失；Vero细胞毒性试验显示，0.001 6 μg·mL-1的各rCsa突变体即可引起明显的CPE；ELISA检测rCsa突变体二免21 d后小鼠血清IgG抗体水平，rCsaN397D组血清的S/N值极显著高于rCsaS398D组和rCsaK405M组(P＜0.01)；用Vero细胞测定rCsa突变体二免21 d鼠血清的中和效价，发现rCsaN397D二免21 d鼠血清的中和效价为6400 MLD·mL-1，极显著高于rCsaS398D和rCsaK405M组免疫血清的中和效价(P＜0.0001)，且高于前期试验中未突变rCsa二免21 d鼠血清的中和效价。综上，rCsaN397D在可溶性、免疫原性方面均优于未突变rCsa、rCsaS398D和rCsaK405M，可作为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的候选抗原。

来源：2025年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第10期