畜牧兽医学报

作者：唐金梦, 余澍楠, 袁一心, 马雨辰, 杜文娟, 于林洋, 李永涛

单位：1. 河南农业大学动物医学院，郑州 450046；2. 国家动物免疫学国际联合研究中心，郑州 450046；3. 动物病原与生物安全教育部重点实验室，郑州 450046

关键词：猪流行性腹泻病毒,IPEC-J2细胞,干扰素诱导跨膜蛋白3,细胞系

基金：国家自然科学基金面上项目(32172839)；国家留学基金公派高级研究学者、访问学者、博士后项目(201908410129)；河南省博士后科研启动基金(HN2022124)

前期研究通过全基因组CRISPR文库筛选人肝癌细胞中调控猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的宿主因子，鉴定出人干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)参与PEDV感染进程，但其在猪源细胞中的功能尚未明确。本研究旨在构建稳定表达人IFITM3(hIFITM3)的猪肠上皮IPEC-J2细胞系，并系统评估其对PEDV复制的影响。首先，构建携带hIFITM3基因的重组慢病毒载体，与包装质粒pMD2.G/psPAX2共转染HEK293T细胞制备病毒颗粒。随后，通过慢病毒感染IPEC-J2细胞，经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株(IPEC-J2hIFITM3)。Western blot、间接免疫荧光法(IFA)及RT-qPCR验证显示hIFITM3在靶细胞中高效表达。CCK-8试验证实hIFITM3过表达未显著影响细胞活力。功能验证表明，IPEC-J2hIFITM3细胞可有效抑制水泡性口炎病毒(VSV-GFP)的早期复制，与其已知抗病毒特性一致。然而，感染PEDV DR13-GFP毒株后，IPEC-J2hIFITM3细胞表现出显著的促病毒增殖效应：24 h时病毒滴度(TCID50·mL-1)较野生型细胞提高约1 000倍。本研究成功建立hIFITM3稳转猪肠上皮细胞模型，其反常促进PEDV复制的特性为解析病毒种属特异性感染机制、开发抗病毒策略及优化病毒分离培养体系提供了重要工具。

来源：2025年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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