畜牧兽医学报

作者：刘君君, 郭东辉, 刘缓缓, 宋润泽, 赵赛娅, 杨钧尧, 魏战勇, 项玉强, 陈丽颖

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046；2. 动物病原与生物安全教育部重点实验室, 郑州 450046；3. 河南省动物性食品病原体监控重点实验室, 郑州 450046

关键词：免疫磁珠,猪丁型冠状病毒,猪传染性胃肠炎病毒,N蛋白,智能手机,比色检测

基金：国家重点研发计划项目(2024YFD1800405；2023YFD1801303)；国家自然科学基金青年基金项目(32302891)；河南省重点研发专项项目(231111113100)；河南省自然科学基金交叉学科创新研究群体项目(232300421001)；河南农业大学“拔尖人才”项目(30501279)

本研究旨在建立灵敏、经济、便携和快速现场可视化检测猪丁型冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)IgG抗体的方法。本研究分别将PDCoV和TGEV的N蛋白偶联到羧基磁珠表面形成“PDCoV-N/TGEV-N蛋白特异性IgG-酶标记抗体”三聚体复合物检测体系，建立基于免疫磁珠的间接ELISA方法，结合智能手机辅助比色传感平台，用于猪血清中PDCoV和TGEV IgG抗体的快速可视化检测。结果显示：以检测PDCoV IgG抗体为例，优化了免疫磁珠间接ELISA的反应条件，其最佳反应条件：磁珠用量25 μg、抗原包被浓度5 μg·mL-1(30 min)、封闭液为2.5% BSA+脱脂奶粉混合液(37 ℃封闭2 h)、血清孵育60 min、酶标二抗1∶8 000稀释(孵育30 min)、TMB显色10 min。在该最佳反应条件下，该方法对PDCoV和TGEV抗体检测效价分别达1∶32 768和1∶8 192，批内/批间变异系数均 < 8%，且与7种常见猪源病原体阳性血清无交叉反应。临床验证显示，与中和试验相比，80份样本的检测总符合率达95%(PDCoV)和96.25%(TGEV)。本研究建立的基于免疫磁珠的智能手机辅助比色传感平台的检测方法具有较高的特异性和敏感性，且重复性好，可用于PDCoV和TGEV临床血清样本的现场快速可视化检测，将为PDCoV/TGEV的流行病学调查和疫苗免疫效果评价提供可靠工具。

来源：2025年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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