畜牧兽医学报

作者：李慧敏, 雷铭楷, 阮胜男, 李盼盼, 李文涛, 何启盖

单位：1. 华中农业大学动物医学院, 武汉 430070；2. 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室, 武汉 430070；3. 湖北洪山实验室, 武汉 430070

关键词：猪流行性腹泻病毒,N蛋白,时间分辨荧光微球,免疫层析法,定量检测

基金：国家自然科学基金面上项目(32473007)；国家现代农业(生猪)产业技术体系(CARS-35)

本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法，为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法，结合荧光微球免疫层析技术，以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles，TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针，以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线)，组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示：本方法灵敏度高，最低检测限达103.1 TCID50·mL-1，较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系，可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短，检测时间为15 min。方法学验证显示，试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应，特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%，重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%，方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法，为临床中PEDV的快速检测提供了工具。

来源：2025年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第9期