畜牧兽医学报

作者：马思琪, 吕雯雯, 陈俊贞, 李建林, 刘昱成, 关团, 丁剑, 刘浩然, 叶鸿艳, 杨莉, 付强, 史慧君

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052；2. 新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室, 乌鲁木齐 830052；3. 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室, 石河子 832000；4. 新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心, 乌鲁木齐 831599

关键词：牛肠病毒,重组腺病毒,结构蛋白VP1,细胞免疫

基金：国家自然科学基金地区基金项目(32160829;32260881)；国家自然科学基金地区科学基金项目(32460879)；自治区研究生科研创新项目(XJ2024G128)；新疆维吾尔自治区兽医学特色学科和“新疆草食动物新药研究与创制”重点实验室开放课题(XJCDVM-HDRC-S202411)

构建表达牛肠病毒(bovine enterovirus，BEV)结构蛋白VP1的重组腺病毒，并对其进行免疫原性和安全性的初步验证。首先，应用PCR扩增BEV VP1基因，并将其克隆至腺病毒载体pDC316-CMV-copGFP，获得的重组质粒pDC316-VP1-copGFP与pBHGlox-△E1, 3cre共转染至293细胞后，进行病毒滴度测定及RT-PCR鉴定；其次，构建pET-32a-BEV-VP1原核表达质粒，优化诱导时间和温度后纯化BEV VP1蛋白；同时，将阴性对照腺病毒rAdv-copGFP、重组腺病毒rAdv-VP1及空白对照PBS分别肌注免疫BALB/c小鼠，观察小鼠临床症状；随后于免疫21 d后感染BEV，并于攻毒第0、5、10、15天采集小鼠肝、肺、脾、肾、小肠，分别提取组织RNA并制作病理切片，检测各组织中病毒载量并观察组织病理变化；最后，使用ELISA检测免疫血清中总IgG抗体、特异性抗体、细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果显示：成功构建腺病毒载体pDC316-VP1-copGFP；筛选出最优VP1原核表达条件为37 ℃诱导8 h，成功纯化出pET-32a-BEV-VP1蛋白；腺病毒免疫小鼠血清能够识别纯化后的VP1蛋白；重组腺病毒免疫能使小鼠产生特异性抗体，从而提高体液免疫与细胞免疫水平。本研究成功构建表达BEV VP1蛋白的重组腺病毒，在免疫小鼠后能够较好地诱导小鼠体内产生体液免疫应答和细胞免疫应答，从而对BEV感染起到了一定的保护作用，为进一步研发BEV新型疫苗奠定基础。

来源：2025年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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