畜牧兽医学报

作者：赵慧玉, 雷伊诺, 幸倩如, 张珊, 张广智, 蒋卉, 沈青春, 丁家波, 姜世金, 范学政

单位：1. 山东农业大学, 泰安 271000；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193；3. 广西大学, 南宁 530004

关键词：产气荚膜梭菌,α毒素,铁蛋白,纳米颗粒,免疫原性

基金：宁夏重点研发项目(2024BBF02014)；中国农科院创新工程重点项目(CAAS-CSLPDCP-202403)

本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a，后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化。对纯化后的αm2ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析。将纯化的αm2ST和FeSC在体外对接，随后，将α毒素-铁蛋白(αm2-Fe)对接产物和αm2ST分别与佐剂混合后免疫小鼠。免疫后每周采集小鼠血清，检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价，并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平。结果显示，在28 ℃条件下，αm2ST和FeSC均以可溶性表达为主。αm2ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性，这说明αm2ST已无毒性。将αm2ST和FeSC体外对接后，经SDS-PAGE、TEM和DLS分析，证实αm2-Fe形成直径32.7~50.7 nm的纳米颗粒，主峰为37.8 nm。小鼠免疫后，αm2-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体(P < 0.001)；小鼠二免后21 d，αm2-Fe组血清中和效价为64倍，显著高于αm2ST组的32倍(P < 0.05)；二免后28 d，αm2-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于αm2ST组(P < 0.05)，流式细胞术分析显示αm2-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+ T细胞(P < 0.000 1)。小鼠试验证实αm2-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫。

来源：2025年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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