畜牧兽医学报

作者：刘添, 吴雨伦, 姚火春, 潘子豪

单位：1. 南京农业大学动物医学院, 南京 210095；2. 农业农村部动物细菌学重点实验室, 南京 210095；3. 世界动物卫生组织猪链球菌病参考实验室, 南京 210095

关键词：约翰病,副结核分枝杆菌,qPCR,三重TaqMan

基金：企业横向课题(HMSY21001)

副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, MAP)是造成反刍动物约翰病的病原，每年给全球畜牧业带来难以估计的经济损失。由于治疗困难，目前对患畜的及时诊断和尽早淘汰是副结核防控的主要手段。MAP的金标准培养检测周期长，而qPCR技术直接检测样本核酸能够快速确定病原，目前广泛应用。本研究旨在针对MAP非插入序列(insertion sequence, IS)靶标建立一种检测MAP的三重TaqMan qPCR方法，能够提高检测的敏感性和特异性。针对MAP基因组中MAP2765c、F57和hspX基因设计引物探针；以本实验室分离的MAP菌株为对照，建立三重qPCR检测体系；临床采集奶肉牛样品181份，和国标(GB/T 27637—2011)进行符合性试验。结果显示，本研究建立的三重qPCR方法灵敏度能达到10 copies·μL-1；重复结果变异系数均小于5%；特异性试验中仅MAP核酸出现扩增曲线；标准曲线R2均大于0.999且扩增效率为97%~100%；三重qPCR方法检测临床样品的阳性率为22.65%(41/181)，比国标方法高(15.47%)，两种方法的检测符合率为76.28%(138/181)；根据牧场检测需求对样品进行分类分析：国标方法和三重qPCR方法在“高MAP风险样品”的样品中检出率分别为25%(17/68)和44.12%(30/68)，而两种方法检测较低MAP风险样品的阳性率均为9.73%(11/113)。本研究设计的三重qPCR方法，灵敏度、特异性和重复性良好，线性和定量准确性高，且能比国标方法更灵敏地在高MAP风险样品中检出MAP。研究结果为奶牛和肉牛养殖场开展副结核病的监测、预警、控制和净化提供优选方案。

来源：2025年第9期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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