畜牧兽医学报

作者：迟顺顺, 吴丹, 王楠, 王婉洁, 聂雨欣, 牟玉莲, 刘志国, 朱振东, 李奎

单位：1. 青岛农业大学动物科技学院，青岛 266109；2. 中国农业科学院(深圳)农业基因组研究所, 岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心, 农业农村部畜禽生物组学重点实验室，深圳 518124；3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193；4. 天津市宁河原种猪场有限责任公司，天津 301504

关键词：MSTN基因编辑猪,重组酶聚合酶扩增,核酸检测,CRISPR/Cas12a

基金：农业生物育种国家科技重大专项(2022ZD04020)；中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS05)

旨在建立一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA)和成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 12a，CRISPR/Cas12a)系统的MSTN基因编辑猪检测方法，以满足基因编辑动物研发、育种等过程中核酸检测以及基因型鉴定的需求。本研究构建含有猪MSTN基因突变序列和野生型序列的标准质粒并设计靶向标准质粒的crRNA，基于RPA和CRISPR/Cas12a技术建立荧光报告和胶体金试纸条检测体系，筛选特异性识别标准质粒的crRNA、优化其反应条件并评价其检测灵敏度，最后通过检测猪耳组织样品评价本方法的准确性和稳定性。研究结果表明，该方法能够特异性识别MSTN基因2 bp碱基缺失序列和MSTN基因野生型序列。荧光报告体系最低可检测到4.1×101 copies·μL-1的标准质粒，胶体金试纸条体系最低可检测到4.1×103 copies·μL-1的标准质粒。通过对猪耳组织样本的检测，证明了该检测体系的准确性和可靠性。综上所述，本研究建立的MSTN基因编辑猪RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有操作简便、特异性和灵敏度高的特点，为MSTN基因编辑猪检测提供了重要技术支撑，具有广阔的应用前景。

来源：2025年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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