畜牧兽医学报

作者：董佳宁, 胡樱凡, 窦宇飞, 李俊, 石磊, 任有蛇

单位：山西农业大学动物科学学院, 太谷 030801

关键词：硒,睾丸间质细胞,PI3K/AKT/FoxO1通路,自噬

基金：山西省现代农业羊产业技术体系专项(2024CYJSTX14-08)

旨在探讨微量元素硒通过PI3K/AKT/FoxO1通路对绵羊睾丸间质细胞自噬的影响及其分子机制。本研究采用3只8月龄健康雄性杜湖杂交绵羊的睾丸进行睾丸间质细胞的分离与培养，根据团队前期研究结果，建立不同浓度亚硒酸钠处理组(0、2、4和8 μmol·L-1)处理细胞18 h，每个处理组6个重复，试验重复3次。使用CCK-8检测细胞增殖活性；采用MDC检测细胞自噬水平、qRT-PCR和Western blot检测细胞内自噬相关基因(ATG5、P62和LC3)表达以及PI3K/AKT/FoxO1信号通路关键因子(PI3K、AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1和核内FoxO1)的表达水平；在此基础上，通过添加AKT特异性激活剂SC79或转染siFoxO1，探究PI3K/AKT/FoxO1信号通路在高硒(8 μmol·L-1)调控绵羊睾丸间质细胞自噬的作用机制。结果表明：2 μmol·L-1组细胞活力最高(P < 0.05)，而8 μmol·L-1组细胞活力最低(P < 0.05)，2 μmol·L-1组ROS含量显著低于其他各组(P < 0.05)，高硒处理导致ROS的积累。使用MDC检测自噬，随着硒浓度升高，在8 μmol·L-1时自噬水平最高(P < 0.05)，显著增加细胞自噬相关因子(ATG5和LC3-Ⅱ/Ⅰ)的丰度(P < 0.05)，显著降低P62表达(P < 0.05)。与对照组相比，8 μmol·L-1组显著抑制(P < 0.05)PI3K和p-AKT活性，显著增加(P < 0.05)FoxO1以及核内FoxO1的表达，显著降低p-FoxO1的丰度(P < 0.05)。为了进一步探讨PI3K/AKT/FoxO1信号通路在高硒诱导细胞自噬中的作用，使用SC79(15 mg·L-1)预处理1 h，或者转染siFoxO1发现在间质细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和ATG5丰度显著降低(P < 0.05)，P62显著上调减轻高硒诱导的自噬(P < 0.05)。同时，SC79显著抑制高硒诱导的FoxO1去磷酸化和大量核转位(P < 0.05)。综上所述，高硒通过抑制PI3K/AKT通路调控FoxO1磷酸化及其核易位，诱导绵羊间质细胞氧化应激和自噬。研究结果有助于阐明高硒对绵羊睾丸间质细胞产生负面影响的分子机制。

来源：2025年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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