畜牧兽医学报

作者：时文健, 徐磊, 张泽, 杨蕊, 辛凌翔, 王楠, 陈祥, 鑫婷

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方), 北京 100193；2. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009；3. 中国兽医药品监察所, 北京 100081；4. 福建农林大学动物科学学院, 福州 350002；5. 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室, 扬州 225009

关键词：结核分枝杆菌牛变种,Himar1转座子,随机插入突变库,生物膜,Rv3671c

基金：十四五重点研发计划(2024YFD1800301)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项课题(2022-YWF-ZYSQ-01)；江苏省人兽共患病学重点实验开放课题(R2211)

旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库，高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库，用苏通培养基进行培养，筛选生物膜表型差异明显的突变株，通过抗性标记挽救法及测序，确定突变基因位置；检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响；进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株，利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响，通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能，检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库，筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株，鉴定其中4个为单基因突变菌株，突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv3136和Rv3671c；构建Rv3671c基因敲除、回补和过表达菌株，通过PCR及Western blot验证构建成功，测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能，发现Rv3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定，为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。

来源：2025年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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