畜牧兽医学报

作者：陈冰冰, 蔡蔚游, 刘玉彤, 王修武, 孙守湖, 贺东生

单位：1. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642；2. 汕头市澄海区动物疫病预防控制中心, 汕头 515800；3. 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心, 肇庆 526238

关键词：A群猪轮状病毒,微滴式数字PCR,检测方法

基金：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心项目(P20211154-0302)

旨在建立一种特异、灵敏的A 群猪轮状病毒(porcine rotavirus A, PoRVA)微滴式数字PCR(ddPCR)新型检测方法。本研究根据GenBank中PoRVA的VP6基因保守序列，设计猪轮状病毒特异性引物和探针，优化其反应条件，从而构建PoRVA的ddPCR检测方法，并测定其特异性、灵敏度、重复性以及临床样品试验。优化反应条件结果显示，最佳引物浓度为600 nmol·L-1，最佳探针浓度为300 nmol·L-1；退火温度在56 ℃时，病毒阳性液滴拷贝数最高；特异性结果显示，自行建立的检测方法仅能检出PoRVA，而猪丁型冠状病毒、猪流行性腹泻病毒等七种对照病毒核酸检测结果均为阴性；灵敏度结果显示，该方法最低检测限度为3.97 copies·μL-1，比普通PCR(最低检测限度3 970 copies·μL-1)和荧光定量PCR(最低检测限度39.7 copies·μL-1)分别高1 000倍和10倍；重复性结果显示，组内和组间变异系数小于10%；对142份临床样品检测显示，ddPCR检出阳性率高于qPCR和PCR。综上，本研究自行建立的PoRVA ddPCR新型检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，适用于猪轮状病毒早期感染诊断和流行病学调查，可为日后持续性监控猪轮状疫情提供可靠的手段。

来源：2025年第8期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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