畜牧兽医学报

作者：王黎, 王秋妍, 杨香香, 孙晓涵, 杜子孟, 尹丁, 张亚兰, 丁小玲, 殷宗俊, 郑先瑞, 张晓东, 丁月云

单位：1. 安徽农业大学动物科技学院，安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，合肥 230036；2. 湖北省畜禽育种中心，武汉 430070

关键词：IRS1,miR-660,TCONS_00056481,双荧光素酶报告基因检测

基金：国家重点研发计划项目(2021YFD1301200)；国家自然科学基金(31972531)；安徽省生猪产业技术体系项目(AHCYJSTX-05-03)

为探明IRS1、TCONS_00056481与miR-660之间的竞争性结合靶向关系。本研究分离培养猪皮下前体脂肪细胞，通过RT-qPCR检测TCONS_00056481、miR-660和IRS1在安庆六白猪(脂肪型)和大白猪(瘦肉型)背部脂肪中的表达水平及在猪前体脂肪细胞分化过程中的时序表达变化，Western blot检测IRS1蛋白在两猪种背脂中的表达情况，通过双荧光素酶报告基因检测系统鉴定miR-660与TCONS_00056481、IRS1之间的靶向结合关系。结果表明，IRS1、miR-660和TCONS_00056481在两猪种背脂中的表达水平均极显著差异(P＜0.01)，且在猪前体脂肪细胞分化过程中均显著差异性表达，说明三者在猪脂肪沉积和猪前体脂肪细胞分化的过程中具有潜在的调控作用；共转染TCONS_00056481野生型载体和miR-660 mimics的双荧光素酶活性极显著低于其对照组(P＜0.01)，共转染IRS1野生型载体和miR-660 mimics的双荧光素酶活性极显著低于其对照组(P＜0.01)；而共转染TCONS_00056481/IRS1突变型载体和miR-660 mimics的双荧光素酶活性与其对照组无显著差异(P＞0.05)，说明miR-660能够通过结合位点发挥对IRS1、TCONS_00056481的调控作用。研究初步验证了lncRNA TCONS_00056481可竞争性结合miR-660从而调控IRS1表达的靶向关系；IRS1、TCONS_00056481和miR-660可作为猪成脂调控的ceRNAs分子候选基因对进行后续研究。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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