畜牧兽医学报

作者：王雨晴, 邢娅, 周小艺, 龚海洲, 赵敏孟, 刘龙, 龚道清, 葛晶, 耿拓宇

单位：扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009

关键词：鹅,脂肪肝,AMPK,线粒体

基金：江苏省自然科学基金青年基金(BK20230580)；国家自然科学基金面上项目(32172717)；国家自然科学基金青年基金(32302754)；中国博士后面上项目(2023M742960)

旨在探究单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)，特别是线粒体AMPK(mAMPK)与鹅肥肝形成的关系。本研究选取了12只70日龄健康朗德鹅公鹅，并随机均分为自由采食对照组(正常肝组)和填饲组(肥肝组)用于活体试验。利用免疫印迹和免疫荧光技术检测鹅肝细胞中AMPKα的主要亚型、亚细胞分布以及鹅肥肝与正常肝全细胞和线粒体中AMPKα1的含量；通过高浓度葡萄糖和棕榈酸处理鹅原代肝细胞，利用免疫印迹技术检测对照组、100 mmol·L-1葡萄糖组和0.5 mmol·L-1棕榈酸组细胞中AMPKα1的含量；在AML12细胞中过表达靶向线粒体的AMPK竞争性抑制多肽(mitochondrial AMPK inhibitor peptide, mitoAIP)，利用免疫印迹技术检测空载对照组和mitoAIP过表达组细胞中AMPK下游蛋白的含量；在AML12细胞中过表达mitoAIP并处理2 mmol·L-1 5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-aminoimidazole-4-carboxamide 1-β-D-ribofuranoside, AICAR)，利用免疫印迹技术检测空载对照组、AICAR+空载对照组、AICAR+mitoAIP过表达组细胞中AMPK下游蛋白的含量；在AML12细胞中过表达mitoAIP，利用流式细胞术检测空载对照组和mitoAIP过表达组细胞中的线粒体膜电位；在AML12细胞中过表达mitoAIP和MitoTimer，利用流式细胞术检测pMitoTimer+空载对照组和pMitoTimer+mitoAIP过表达组细胞中线粒体的氧化应激水平；在AML12细胞中过表达mitoAIP并进行油酸处理，利用油红O染色分析油酸+空载对照组和油酸+mitoAIP过表达组细胞中的脂肪沉积情况。所有细胞试验中的重复数均不少于3次。研究发现，鹅肝中AMPKα以AMPKα1为主要亚型，主要集中在线粒体组分中且定位于线粒体外膜；鹅肥肝全细胞样和线粒体样中总的AMPKα1(tAMPKα1)与磷酸化的AMPKα1(pAMPKα1)蛋白含量均低于正常肝(P＜0.05，P＜0.01)，但线粒体样中tAMPKα1的减少未达到显著水平；高浓度葡萄糖处理对tAMPKα1和pAMPKα1蛋白丰度无显著影响，而棕榈酸处理降低了线粒体样中pAMPKα1的蛋白丰度(P=0.079)；在AML12细胞中，过表达mitoAIP显著增加了线粒体中pAMPKα1、tAMPKα1、pACC1和tACC1的蛋白丰度(P＜0.05，P＜0.01)，但对全细胞样中AMPK和ACC1蛋白丰度无明显影响；AICAR处理细胞会导致全细胞样中pAMPKα1和pACC1蛋白丰度显著增加(P＜0.05)，线粒体样中pAMPKα1、tAMPKα1、pACC1、tACC1和tULK1蛋白丰度显著减少(P＜0.05)；过表达mitoAIP除了显著抑制AICAR诱导的全细胞样中pACC1蛋白丰度外(P＜0.05)，并不显著影响AICAR处理引起的其他蛋白的丰度变化；mitoAIP过表达可引起线粒体膜电位下降、线粒体氧化应激水平升高以及细胞中脂肪含量的增加(P＜0.05，P＜0.01)。综上所述，mitoAIP在调节全细胞样和线粒体样中AMPK及其底物的蛋白丰度、线粒体的膜电位和线粒体的氧化应激水平方面与已知的全域性AIP的作用有所不同，提示mAMPK在调节线粒体功能上具有独特作用；AML12细胞的mitoAIP过表达试验结果提示，鹅肥肝中磷酸化mAMPK含量的降低可诱导脂肪沉积增加、线粒体膜电位下降和氧化应激水平升高，但这些效应可能还受到其他机制的调控。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第7期