畜牧兽医学报

作者：刘雨欣, 陈思, 高阳, 顾德媛, 彭海涛, 张东, 张如, 许会会, 刘亚乔, 杨艳玲

单位：1. 中国农业科学院特产研究所, 长春 130000；2. 中华人民共和国大窑湾海关, 大连 116600

关键词：布鲁菌,外膜囊泡,蛋白质组学,免疫原性

基金：“十四五”重点研发计划(2023YFD1800700；2023YFD1800703)；中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ZDRW202410)；吉林省肉牛专项(YDZJ202203CGZH051)

旨在提取羊布鲁菌生物3型外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)并分析其蛋白组成成分，制备OMVs亚单位疫苗，评价OMVs疫苗的免疫原性。本研究利用差速离心法提取了OMVs，通过SDS-PAGE、透射电镜和ZeTA纳米粒径对OMVs进行鉴定；利用Label free液相质谱技术鉴定OMVs蛋白质组成成分，并进行GO聚类分析和KEGG富集分析；OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后，对小鼠脾脏进行病理检测和T细胞亚群分类检测；对小鼠血清进行IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A炎性细胞因子水平检测和IgG 1、IgG 2a和IgG 2b免疫球蛋白含量检测，评价OMVs免疫后小鼠的病理变化和细胞免疫水平。结果显示：成功提取了OMVs，其粒径大小为20~200 nm，相对分子质量在10~130 ku之间。蛋白质组学鉴定结果显示，OMVs中含有1 612种蛋白质，其中包括Omp2b、Omp25、Omp31、Omp19和Bp26等多种外膜蛋白，以及脂蛋白和ABC转运体相关蛋白质。OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后，小鼠脾脏未见明显的淋巴细胞排列疏松及坏死；诱导小鼠产生高水平IgG免疫球蛋白含量；同时诱导小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17A和TNF-α炎性细胞因子表达量上升，IL-10和IL-4炎性细胞因子表达量下降；CD4+/CD8+T细胞比值增加。本研究证明OMVs中含有多个有效的免疫原性抗原，能诱导小鼠产生较好的细胞免疫水平，为明确布鲁菌OMVs蛋白成分和布鲁菌亚单位疫苗研发奠定了理论基础。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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