畜牧兽医学报

作者：耿小玲, 李瑞芳, 徐卫兵, 杜晶莹, 张曼玉, 孙卿, 蒋蔚, 米荣升, 陈兆国, 王权

单位：1. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2. 上海市浦东新区大团镇经济发展服务中心，上海 201311；3. 西北农林科技大学，杨凌 712100

关键词：刚地弓形虫,CRISPR/Cas9,TR,ROP5,ROS

基金：上海自然科学基金(22ZR1476000);上海市科技兴农项目(2022-02-08-00-12-F01085)

为了探究弓形虫TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用，本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TR与ROP5双基因缺失株(TR-ROP5-KO)弓形虫。通过体外增殖、入侵及小鼠体内毒力试验发现，与RH株、TR基因缺失株(TR-KO)及ROP5基因缺失株(ROP5-KO)相比，TR-ROP5-KO株在体外细胞中入侵、增殖能力及小鼠体内毒力作用减弱，表明弓形虫TR与ROP5基因双缺失不仅导致虫体在体外细胞中的生存活力减弱，还降低对宿主的毒力作用；通过检测TR/ROP5基因缺失株的氧化应激水平以及感染RAW264.7细胞的活性氧(ROS)水平发现，TR-ROP5-KO株引发的氧化应激水平虽然显著高于RH株(P < 0.05)，但与TR-KO株无显著差异(P > 0.05)；利用RT-qPCR检测TR/ROP5基因缺失株感染RAW264.7细胞的NF-κB、IL-12、IFN-γ mRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现，TR-ROP5-KO株感染组虽显著高于RH株感染组(P < 0.05)，但却未显著高于TR-KO株感染组(P > 0.05)，表明弓形虫的TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究构建TR与ROP5的双基因缺失株的方法探究两者在抗宿主ROS损伤中并无协同作用，为后续解析弓形虫多个基因功能的研究提供了方法依据，为弓形虫免疫逃避机制的研究提供了基础材料。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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