畜牧兽医学报

作者：王飞燕, 刘超凡, 张亚楠, 周晓甜, 任静, 袁晨, 李潭清, 宋勤叶

单位：河北农业大学动物医学院 & 河北省兽医生物技术创新中心，保定 071000

关键词：猪IL-15,单克隆抗体,双抗体夹心ELISA,定量检测

基金：河北农业大学科研发展基金计划项目(JY2022025)；河北省高等学校科学研究项目(QN2022046)

旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb)，建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15，应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白，随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，在加强免疫后第3天，分离小鼠脾细胞，将脾细胞与SP2/0细胞融合，筛选阳性杂交瘤细胞，并对其分泌的IL-15单克隆抗体进行鉴定；然后基于单克隆抗体建立IL-15夹心ELISA方法。结果显示：获得9株分泌抗IL-15 McAb的杂交瘤细胞(1E8、1F4、2D3、2C10、2F3、2D10、3F4、3D4、3D5)，分泌的抗体均为IgG2bκ型。以制备的单抗2D10和2C10分别为捕获抗体及酶标抗体建立的夹心ELISA最低可检测31.25 ng·mL-1的IL-15蛋白，与其它细胞因子或蛋白(IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、Gzms-B、IFN-γ、TNF-α)无交叉反应，批内和批间重复的变异系数分别为2.56%和3.39%。该夹心ELISA可定量检测血清、组织液和细胞培养物等样品中的IL-15。综上，成功制备了猪IL-15单克隆抗体，建立了定量检测IL-15的双抗体夹心ELISA方法，为IL-15相关研究提供了重要工具。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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