畜牧兽医学报

作者：钟梦丹, 吉艳红, 张吉豫, 朱啟超, 冯赛祥, 廖明

单位：1. 华南农业大学兽医学院，广州 510000；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控重点实验室，兰州 730000

关键词：CHI3L1,纳米抗体,表征

基金：甘肃省自然科学基金面上项目(22JR5RA028)；甘肃省重大科技专项(22ZD6NA001)

几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)在感染甲型流感病毒(IAV)后，表达水平发生显著变化，暗示其可能参与抗病毒免疫反应的调控。然而，当前尚未发现CHI3L1与IAV之间的直接相互作用。由于CHI3L1在免疫过程中可能具有重要作用，研究者推测其可能在调节抗病毒免疫中扮演关键角色。然而，现有的研究工具不足，迫切需要开发一种高效的CHI3L1检测方法，以助力后续的研究工作。因此本研究以CHI3L1为目标蛋白，通过构建CHI3L1真核表达质粒，成功进行了体外表达与纯化，并使用该纯化蛋白免疫羊驼。通过4次免疫后，采集羊驼外周血并分离淋巴细胞，测定抗体水平达到了1∶64 000，符合构建噬菌体展示文库的标准。随后，利用巢式PCR扩增了单个重链可变区(VHH)基因，并将该基因克隆至pComb噬菌体载体，成功构建了一个库容量为1.2×108 cfu·mL-1的CHI3L1纳米抗体噬菌体展示文库。通过三轮的免疫亲和筛选和富集，筛选得到四株不同序列的特异性纳米抗体(Nb)。随后，研究进一步构建了CHI3L1特异性纳米抗体的真核表达质粒，并转染293F细胞进行表达，使用Protein A亲和纯化系统纯化了所表达的蛋白。经ELISA测定，Nb-YC8和Nb-YC4显示出较好的亲和力。利用Western blot进一步验证了这些纳米抗体与商品化抗体相比，能够正确识别CHI3L1蛋白。免疫荧光分析显示，Nb-YC4、Nb-YD10和Nb-YF8能够识别293T细胞中表达的CHI3L1蛋白，而Nb-YC8未能成功识别CHI3L1，推测其可能识别的是线性表位。本研究成功筛选并鉴定了4株具有不同亲和力的CHI3L1特异性纳米抗体，这些抗体有望成为研究机体免疫系统中CHI3L1功能的有力工具。通过对CHI3L1的进一步研究，可能有助于揭示其在抗病毒免疫反应中的潜在作用，并为开发基于CHI3L1的诊断或治疗手段提供基础。

来源：2025年第7期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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