畜牧兽医学报

作者：赵云海, 张阳阳, 马海云, 王青, 何肖肖, 刘凯, 张钰婷, 刘玉东, 杨永宁, 武小椿, 邢小勇, 权国梅, 张志雄, 包世俊

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070；2. 青海农牧科技职业学院, 西宁 812100

关键词：牛支原体,Dnak蛋白,原核表达,黏附,免疫原性

基金：甘肃省农业农村厅科技支撑项目(KJZC-2024-15);国家自然科学基金(32072863);甘肃农业大学科技创新基金(GAU-KYQD-2021-08)

旨在研究牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)分子伴侣Dnak (chaperone protein Dnak)蛋白的免疫原性和黏附特性。根据GenBank中Mb HB0801株Dnak基因设计引物，利用Overlap PCR扩增获得Mb Dnak基因，构建重组质粒pET-Dnak, 经双酶切和测序鉴定正确后，将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)并通过异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得抗rDnak血清，利用Western blot、ELISA和间接免疫荧光检测Dnak蛋白的免疫原性以及Dnak蛋白在Mb中的分布。通过补体介导的杀菌试验分析检测rDnak抗血清介导的激活补体杀支原体活性。利用黏附及黏附抑制试验分析Dnak蛋白对宿主细胞的黏附功能。结果表明，重组蛋白rDnak主要以上清可溶形式在大肠杆菌中成功表达，其相对分子质量约为70 ku，具有良好的免疫原性；其多抗血清可有效激活补体杀伤支原体；Dnak蛋白在Mb的细胞膜和细胞质中均存在，是Mb的一种黏附相关蛋白，参与对EBL细胞的黏附。综上，Dnak蛋白是Mb中具有良好免疫原性的黏附相关蛋白，为探究Mb的致病机制奠定基础。

来源：2025年第6期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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