畜牧兽医学报

作者：潘红, 周赛赛, 袁红根, 宋云峰

单位：华中农业大学动物医学院，武汉 430070

关键词：口蹄疫病毒,3′非编码RNA负链,互作宿主蛋白,Ddx18,2C

基金：国家重点研发计划(2021YFD1800303)

本研究旨在筛选口蹄疫病毒(foot and mouth disease，FMDV)负链RNA复制过程中与3′UTR结合的宿主蛋白。首先，通过RNA pull down结合质谱，鉴定出与3′UTR负链结合的宿主蛋白。对质谱鉴定到的蛋白结果进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分析和互作网络筛选分析，并构建真核表达质粒以及原核表达质粒，表达该互作蛋白来验证RNA与蛋白的互作特异性。其次，截短3′UTR探究RNA与蛋白的互作区域，最后利用Co-IP探究宿主互作蛋白与病毒蛋白的互作关系。结果发现与3′UTR互作结合的蛋白多为核仁蛋白，其中以DEAD-box RNA解旋酶蛋白家族的Ddx18蛋白作为重点研究对象。通过构建该蛋白的真核表达载体，利用RNA pull down、RIP, 以及EMSA证实Ddx18确实与3′UTR负链互作。转录出截短的3′UTR负链RNA，利用RNA pull down试验得出Ddx18与3′UTR负链的互作不依赖poly(U)，且不与截短后的SL1和SL2互作。利用Co-IP试验证明2C病毒蛋白能与Ddx18蛋白互作。综上，3′UTR与Ddx18蛋白的互作可能基于RNA的空间结构，而2C病毒蛋白与Ddx18蛋白结合，提示2C可能间接结合3′UTR而共同形成复制复合物参与到FMDV的复制中。通过筛选与3′UTR负链互作的宿主蛋白，为进一步探究FMDV复制相关机制从而研究相关药物靶点奠定实验基础。

来源：2025年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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