畜牧兽医学报

作者：张晓玲, 何兴林, 张梦迪, 李鹏飞, 孙玉梅, 马海龙, 朱红梅, 张梦佳, 李文涛

单位：1. 华中农业大学动物医学院，武汉 430070；2. 生猪健康养殖协同创新中心实验室，武汉 430070；3. 湖北洪山实验室，武汉 430070；4. 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室，武汉 430070；5. 华中农业大学动物疫病诊断中心，武汉 430070

关键词：猪瘟病毒,E2亚单位疫苗,自组装纳米疫苗,中和抗体

基金：国家现代农业产业技术体系(CARS-35)；影子科技-华中农大健康食品产业研究院项目-猪场重大疫病监测与预警创新平台建设(IRIFH202209)

本研究旨在开发一种猪瘟E2纳米颗粒疫苗，并对其免疫原性进行分析。以猪瘟病毒石门株E2基因序列为模板，对其胞外域进行人源密码子优化，通过293F哺乳动物细胞真核表达系统制备E2、E2-pFc(E2与猪源抗体的Fc片段融合表达)、SpyTag-E2(E2与SpyTag融合表达)以及纳米骨架蛋白LS(lumazine synthase-protein A)，原核表达系统纯化纳米骨架蛋白mi3(mi3-SpyCatcher)，进一步组装成纳米颗粒LS-E2-pFc NP和mi3-E2 NP，并通过透射电镜和动态光散射试验进行鉴定，各组蛋白分别与ISA201佐剂乳化，制备亚单位疫苗。选用1.5~2.0 kg重的日本长耳大白兔35只，随机分为7组，包括空白对照组(n=3)、PBS阴性对照组(n=3)、E2组(n=5)、E2-pFc组(n=5)、LS-E2-pFc NP组(n=5)、mi3-E2 NP组(n=5)和CSFV E2商业化亚单位疫苗组(n=3)。于0、21 d进行肌肉注射免疫，42 d将CSFV C株经耳缘静脉按照100 RID50 ·只-1进行攻毒，通过阻断ELISA、中和试验、体温监测和RT-qPCR等试验评估兔的特异性抗体水平、中和抗体水平、兔体定型热反应以及脾脏病毒载量。结果显示，各组分蛋白成功表达，纯化后的蛋白条带单一，纯度较高。透射电镜可观察到粒径在10~70 nm的纳米颗粒结构，动态光散射试验观察到mi3-E2平均粒径(68 nm)大于mi3(42.73 nm)，LS-E2-pFc平均粒径(42.4 nm)大于LS(13 nm)。免疫试验结果表明，E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗均有良好的免疫效果，攻毒前7 d，血清中特异性抗体阻断率均在89%以上，组间差异不显著(P>0.05)。攻毒后，PBS阴性对照组出现典型的兔体定型热反应，其余免疫组的体温变化不明显；攻毒后7 d，E2、E2-pFc、LS-E2-pFc NP、mi3-E2 NP疫苗和商业化亚单位疫苗组的中和抗体效价分别为1 ∶10 392.4、1 ∶37 168.4、1 ∶75 473.6、1 ∶20 201.8、1 ∶2 407，其中，LS-E2-pFc NP组的中和抗体水平最高。RT-qPCR结果显示，E2组有一只兔检出低拷贝的病毒载量，拷贝数为5.83 copies ·μL-1，其余免疫组未检到病毒载量。以上结果显示LS-E2-pFc NP免疫组效果最好，中和抗体水平最高。这种“标记”疫苗可以对自然感染和免疫接种的动物进行鉴别诊断，有助于猪场净化猪瘟。

来源：2025年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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