畜牧兽医学报

作者：张宇, 程凡玉, 俞赵荣, 邵颖, 魏宁波, 陈芳芳, 王振宇, 宋祥军, 涂健, 祁克宗

单位：安徽农业大学动物医学院 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室, 安徽省动物性食品质量与 生物安全工程实验室, 合肥 230036

关键词：血清4型禽腺病毒,单克隆抗体,抗体鉴定,Fiber1蛋白,IHC,免疫共沉淀

基金：国家自然科学基金(31972642)；安徽省重点研究与开发计划(202204c0602003)

本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4，FAdV-4)的单克隆抗体，鉴定其特异性结合位点，并评估其在免疫组化(immunohistochemistry，IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠，通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法筛选出一株阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆，并对所制备的单克隆抗体进行效价检测。利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)与蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定单克隆抗体生物学特性，构建了pCold TF-Hexon、pET-32a(+)-Fiber1、pCold TF-Penton、pCold TF-Fiber2的原核表达载体，并通过Western blot初步鉴定所得单克隆抗体的特异性结合位点，在检测出抗体的亚型后，将其初步应用于IHC和免疫沉淀试验。结果表明本试验获得1株稳定分泌抗Fiber1蛋白的单克隆抗体，并将其命名为5C7。该抗体效价为1∶102 400，亚型为IgG-2b，表现出良好的生物学特性。在IHC中，能够观察到明显的病变特征；在免疫沉淀试验中，5C7可作为捕获抗体，与病毒感染细胞中的Fiber1蛋白特异性结合。结果提示，本试验通过全病毒粒子免疫小鼠所制备的单克隆抗体能够特异性识别Fiber1蛋白，并在IHC和免疫沉淀反应中显示出良好的应用前景，为FAdV-4实验室病理诊断方法的建立和Fiber1蛋白的功能研究奠定了基础。

来源：2025年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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