畜牧兽医学报

作者：赵莹, 王靖雷, 王萌, 王立斌, 张倩, 李志杰, 马鑫, 余四九, 潘阳阳

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070；2. 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心, 兰州 730070

关键词：乳源外泌体,连翘酯苷A,山奈酚,牛乳腺上皮细胞,炎性因子

基金：甘肃省重点研发计划-农业领域(24YFNA015)；国家自然科学基金地区项目(32160859)；甘肃农业大学青年导师基金(GAU-QDFC-2022-02)

本试验旨在制备负载连翘酯苷A(forsythoside A，FTA)和山奈酚(kaempferol，KPF)的乳源外泌体(milk-derived EVs，miEVs)递药系统，并体外评价其对脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)诱导牛乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T，MAC-T)炎症模型的细胞迁移效果及相关炎性因子的影响。利用前期已建立并优化的乙酸法提取乳源外泌体，低温超声共孵育的方法制备负载FTA乳源外泌体(FTA-miEVs)和负载KPF乳源外泌体(KPF-miEVs)，以及建立炎症模型，并通过透射电子显微镜(transmission electron microscope，TEM)和免疫印迹(Western blot)方法评估制备效果，液质联用方法进行载药量测定，免疫荧光和划痕试验观察炎症模型对负载抗炎药物的乳源外泌体摄取，及炎症模型的细胞迁移效果的影响，酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR，RT-qPCR)方法验证负载抗炎药物的乳源外泌体对炎症模型中相关炎性因子分泌及基因表达水平的影响。结果表明：FTA-miEVs和KPF-miEVs均具有外泌体典型结构，外形呈圆形，有部分凹陷，似“茶托”形结构；均可表达表面及内部特异性标记蛋白白细胞分化抗原81(cluster of differentiation 81，CD-81)和热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)；载药量分别为0.78%和9.79%；在8 h内，LPS诱导的MAC-T炎症模型对其摄取效果良好；且在24 h时，FTA-miEVs和KPF-miEVs对炎症模型细胞迁移的抑制率分别为608.48%和522.88%，显著高于单独使用miEVs、FTA和KPF的效果；其对炎症模型中白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)的分泌及基因表达水平均优于单独使用miEVs、FTA和KPF。综上所述，本试验成功制备FTA-miEVs和KPF-miEVs递药系统，综合结果发现在同等药量下可提高FTA和KPF的抗炎效果，为外泌体在药物递送系统的制备及临床应用提供新的思路。

来源：2025年第5期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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