畜牧兽医学报

作者：黄程, 杨志远, 林健, 程慧敏, 王米, 毛惠琳, 王国良, 刘贵明, 赵际成, 刘月焕

单位：1. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所, 北京 100097；2. 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司, 苏州 215200；3. 北京市农林科学院生物技术研究所, 北京 100097

关键词：H9亚型,禽流感病毒,mRNA疫苗,LNP,免疫保护

基金：北京市农林科学院院长基金(YZJJ202102)；北京市农林科学院青年科研基金(QNJJ202234)；现代农业产业技术体系北京市家禽创新团队(BAIC06-2024)

H9亚型禽流感(avian influenza，AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大，灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制，有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列，优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列，连接至pUC57载体构建体外转录模板，经体外转录、加帽、纯化，采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA，并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1)，Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡，随机分成4组，每组5只，分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25 μg HA mRNA LNP、25 μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清，检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体，每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含106.0 EID50)，攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞，分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平，观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达，经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8，极显著高于2个mRNA LNP组(P < 0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P < 0.05)，HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P < 0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护，而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。

来源：2025年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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