畜牧兽医学报

作者：侯宛辰, 徐童

单位：东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030

关键词：双酚A,大麻二酚,猪肠上皮细胞,细胞凋亡,细胞自噬,BRD4/AMPK/mTOR

基金：东北农业大学“青年才俊”项目；2023年国家级大学生创新创业训练计划项目(SIPT项目编号：202310224097)

本研究旨在探究大麻二酚(cannabidiol, CBD)通过BRD4/AMPK/mTOR信号通路缓解双酚A(bisphenol A, BPA)导致的猪肠上皮细胞(pig intestinal epithelial cells, IPEC-J2)的凋亡和自噬的作用机制。首先通过CCK-8法测定细胞活力，筛选出BPA对IPEC-J2细胞的半数抑制浓度和CBD对BPA的最适拮抗剂量。用分组比较方法，将试验分为空白对照组、BPA组(150 μmol·L-1 BPA)、BPA+CBD组(150 μmol·L-1 BPA+10 μmol·L-1 CBD)、BPA+CBD+CQ组(150 μmol·L-1 BPA+10 μmol·L-1 CBD+20 μmol·L-1 CQ)和CBD(10 μmol·L-1 CBD)组。通过AO/EB染色法以及流式细胞术检测IPEC-J2细胞的凋亡率；通过DCFH-DA法检测细胞中ROS水平；通过氧化应激试剂盒检测氧化应激水平；通过免疫荧光技术检测LC3-Ⅱ蛋白表达水平；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)来检测细胞凋亡、自噬、肠紧密连接蛋白和BRD4/AMPK/mTOR信号通路相关基因的表达水平。结果表明，经150 μmol·L-1 BPA处理，IPEC-J2细胞凋亡和自噬水平均升高，经10 μmol·L-1 CBD处理后，细胞凋亡和自噬水平均降低；CBD可以显著下调由BPA引起的ROS和MDA水平升高(P < 0.05)，上调BPA引起的GSH-Px活性降低(P < 0.05)；CBD可以显著下调由BPA引起的细胞凋亡相关基因(Bax和caspase-3)、细胞自噬相关基因(P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和ATG5)和BRD4/AMPK/mTOR通路(AMPK)相关基因的表达水平升高(P < 0.05)，上调BPA引起的LAMP1、Bcl-2、BRD4、mTOR、ZO-1和Claudin-1的表达水平降低(P < 0.05)；免疫荧光结果表明，CBD可以显著降低由BPA所诱导的IPEC-J2细胞LC3-Ⅱ的表达与分布(P < 0.05)。综上所述，CBD可以缓解BPA导致的IPEC-J2细胞氧化应激，进而通过BRD4/AMPK/mTOR信号通路拮抗BPA诱导的IPEC-J2细胞凋亡和自噬。

来源：2025年第4期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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