畜牧兽医学报

作者：王红, 赵为民, 程金花, 李惠侠, 方晓敏

单位：1. 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所, 南京 210014；2. 南京农业大学动物科技学院, 南京 210095；3. 江苏省农业科学院畜牧研究所, 南京 210014

关键词：猪,CYP3A29,核心启动子,RUNX1,转录调控

基金：国家自然科学基金(31872338)；江苏省种业振兴“揭榜挂帅”项目(JBGS[2021]103)

旨在鉴定猪CYP3A29基因核心启动子及相应的转录调控因子，分析转录因子对CYP3A29启动子活性的调控。本研究以3头健康的大白母猪(30 kg)为试验材料，利用PCR和Western blot检测CYP3A29基因在猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉)中的表达分布；构建不同片段长度的CYP3A29基因启动子双荧光素酶报告载体，转染293T和AML12细胞系，检测荧光素酶活性，确定CYP3A29基因的核心启动子区域；利用Animal TFDB网站分析CYP3A29核心启动子区域可能存在的转录调控因子，针对核心启动子区域构建分段缺失双荧光素酶报告载体，检测荧光素酶活性大小，确定转录因子结合位点；构建转录因子结合突变位点的双荧光素酶报告载体和转录因子shRNA载体，探讨转录因子对CYP3A29核心启动子的调控作用。结果显示，CYP3A29基因在猪肝脏中表达量最高；CYP3A29启动子4个不同检测区域(-2 026~+62 bp、-1 526~+62 bp、-1 026~+62 bp和-528~+62 bp)中-528~+62 bp活性最高，为CYP3A29核心启动子区；CYP3A29启动子-528~-448 bp区域负向调控核心启动子活性，且含有潜在的转录因子RUNX1结合位点；突变RUNX1结合位点可显著降低-528~+62 bp启动子的荧光素酶活性，而干扰RUNX1基因则显著升高-528~+62 bp野生型启动子的荧光素酶活性，但对-528~+62 bp突变型启动子的荧光素酶活性无显著影响，提示RUNX1转录因子可负向调控CYP3A29基因核心启动子活性。本研究结果为进一步解析猪CYP3A29基因的转录调控机制奠定了基础。

来源：2025年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第3期