畜牧兽医学报

作者：张越, 茹毅, 郝荣增, 杨锐, 赵陇和, 李亚军, 杨洋, 张荣, 蒋成辉, 郑海学

单位：1. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州大学动物医学与生物安全学院, 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730000；2. 中农威特生物科技股份有限公司, 兰州 730046

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV),H108R蛋白,多克隆抗体,免疫原性

基金：国家重点研发计划(2021YFD1801302-3)；甘肃省自然科学基金重点项目(23YFNA0011)；中央高校基本科研业务费专项(lzujbky-2022-ct02)；兰州市青年科技人才创新项目(2023-QN-3)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(CAAS-ZDRW202409)；国家生猪产业技术体系(CARS-35)；甘肃省科技重大专项(23ZDKA0002)

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白，通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性，为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质，选择编码蛋白33~108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体，转化后经IPTG诱导表达，用镍亲和层析纯化目标蛋白质。免疫小鼠利用流式细胞术检测脾脏活化的CD4+和CD8+T淋巴细胞，分离小鼠血清测定特异性抗体滴度，利用Western blot和IFA鉴定多克隆抗体的特异性。并用试剂盒检测血清中细胞因子含量，将血清与ASFV-GFP病毒孵育评估抗体是否能抑制病毒的复制。生物信息学分析表明H108R蛋白为亲水性蛋白质，有跨膜区，无信号肽，蛋白二三级结构中存在较多α-螺旋。SDS-PAGE、Western blot显示IPTG诱导后，成功表达纯化H108R蛋白。蛋白免疫小鼠后能够诱导小鼠脾脏T细胞的活化，刺激机体产生更高水平的细胞因子。免疫制备的多克隆抗体效价为1∶128 000，能与ASFV-GFP病毒特异性结合，与病毒孵育后能明显抑制病毒的复制。本研究成功表达制备了ASFV H108R蛋白，免疫能够诱导脾脏T淋巴细胞活化，引起细胞因子水平升高，制备的多克隆抗体能够明显抑制病毒的复制，具有较好的免疫原性，为深入研究H108R蛋白的生物学功能及疫苗研究奠定基础。

来源：2025年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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