畜牧兽医学报

作者：李慧中, 张弛, 严丹丽, 宋鹏慧, 汪飞燕, 冯茜茜, 刘丹丹, 许金俊, 陶建平

单位：1. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009；2. 江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

关键词：毒害艾美耳球虫,EnROP30,克隆,表达,免疫保护力

基金：国家自然科学基金项目(31972698)；江苏省高校优势学科建设四期工程项目(2021)；高等学校学科创新引智计划资助(D18007)

旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体EnROP30基因，并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡，评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板，RT-PCR扩增EnROP30基因，连接至pGEMⓇ-T-Easy载体，测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，重组菌经测序鉴定后诱导表达，并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体，分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(SZ)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后，应用荧光定量PCR分析EnROP30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200 μg·羽-1)、中剂量(100 μg·羽-1)和低剂量(50 μg·羽-1)免疫雏鸡，同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照，以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标，评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示：该基因全长1 605 bp，编码534个氨基酸，推导相对分子质量为55.55 ku；重组蛋白大小约为65 ku，以可溶形式存在，能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别；在SZ和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白，其分子质量大约为62 ku；EnROP30蛋白定位在SZ和MZ-2的顶端；MZ-2中EnROP30转录水平显著高于SZ(P < 0.05)。各试验组的成活率均为100%；免疫组的平均增重增加，病变记分显著降低(P＜0.05)；中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上：成功克隆表达了EnROP30基因，重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。

来源：2025年第3期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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