畜牧兽医学报

作者：何雨, 王翔宇, 狄冉, 储明星, 梁琛

单位：1. 山西农业大学动物科学学院, 太谷 030801；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 畜禽生物育种全国重点实验室, 北京 100193

关键词：绵羊,卵巢颗粒细胞,BMP4,间隙连接,GJA1,SMAD4

基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y2024YJ08);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系资助(CARS-38)；山西省基础研究计划面上项目(20210302123371)；山西农业大学博士科研启动项目(2021BQ04)

旨在探索骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4, BMP4)对绵羊卵巢颗粒细胞中间隙连接蛋白基因(gap junction protein alpha 1, GJA1)表达的影响及其分子调控机制。本研究利用廊坊市屠宰场收集的2~4岁健康绵羊卵巢分离颗粒细胞，采用免疫荧光染色技术定位GJA1在颗粒细胞中的分布。将细胞随机分为4组，分别添加0、10、50和100 ng·mL-1浓度的重组BMP4蛋白，每组3个重复，培养24 h，利用CCK-8法评估细胞活性，RT-qPCR和Western blot研究BMP4对GJA1的mRNA和蛋白表达水平的影响。为探究BMP4调控GJA1表达的潜在机制，将细胞随机分为3组，每组3个重复，除对照组外分别添加10 μmol·L-1 BMP I型受体抑制剂(Dorsomorphin)和干扰小RNA敲除SMAD家族蛋白4(SMAD family member 4, SMAD4)，均添加100 ng·mL-1的BMP4处理细胞24 h，RT-qPCR检测GJA1和SMAD4表达量，Western blot分析测定GJA1和SMAD4表达水平以及SMAD1/5/8的磷酸化水平，最后利用划痕染料示踪试验检测绵羊卵巢颗粒细胞之间的间隙连接活性。结果显示，BMP4显著抑制了绵羊卵巢颗粒细胞中GJA1表达和间隙连接活性(P < 0.05)，此抑制效应在添加Dorsomorphin和敲除SMAD4后显著减弱(P < 0.05)，同时，BMP4处理显著增加了SMAD1/5/8的磷酸化水平(P < 0.05)。综上，BMP4通过SMAD1/5/8-SMAD4信号转导调控GJA1表达进而影响颗粒细胞间隙连接活性，本结果增加了对绵羊BMP/SMAD通路调控颗粒细胞间隙连接活性的了解，为改进体外卵泡成熟方法和高繁母羊的分子育种提供了基础。

来源：2025年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第2期