畜牧兽医学报

作者：卢娜, 高钰, 赵嘉伟, 苏迪, 陈家磊, 罗忠礼

单位：重庆医科大学基础医学院 分子医学与肿瘤研究中心, 重庆 400016

关键词：猫传染性腹膜炎,猫传染性腹膜炎病毒N蛋白,mRNA疫苗,体外转录载体

本研究旨在设计猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus，FIPV)mRNA疫苗体外转录载体，并评估其转录出的FIPV mRNA疫苗的免疫原性。选取FIPV的核衣壳(nucleocapsid，N)蛋白，通过序列优化，结合CureVac mRNA技术平台，选择合适的非编码序列、信号肽序列和poly A尾部。将构建完成的目的序列克隆到pBluescript Ⅱ KS(+)载体上，经过载体的线性化单酶切后，在体外进行转录，合成编码FIPV N基因的mRNA，并经过加帽、纯化和琼脂糖凝胶电泳分析。通过体外转染试验验证抗原蛋白在细胞内的表达情况。在小鼠体内接种FIPV N-mRNA疫苗后，检测其体液免疫和细胞免疫反应。琼脂糖凝胶试验表明，设计的mRNA体外转录载体成功制备出稳定单一的mRNA序列。转染进细胞后，可在12~24 h内稳定表达目标抗原蛋白。ELISA试验结果显示FIPV N-mRNA疫苗在小鼠体内引起了强烈的体液免疫反应，其特异性抗体、IL-4、TNF-α水平明显高于对照组。Elispot试验结果显示FIPV N-mRNA组脾细胞分泌的IFN-γ的含量显著高于对照组。以FIPV N蛋白为抗原的体外转录载体所转录的mRNA疫苗，在细胞内能够高效表达目的蛋白，具有良好的免疫原性，有效引起小鼠的体液免疫和细胞免疫反应。FIPV N-mRNA疫苗有望成为猫传染性腹膜炎的潜在候选疫苗，mRNA体外转录载体的制备为传染性疾病mRNA疫苗的设计与研发提供了重要的参考价值。

来源：2025年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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