畜牧兽医学报

作者：张冬萱, 王智豪, 乔岩, 赵肖肖, 范松杰, 张超

单位：河南农业大学动物医学院, 农业农村部动物生化与营养重点开放实验室, 郑州 450046

关键词：猪流行性腹泻病毒,S1-CTD蛋白,磁珠法,核酸适配体,亲和力

基金：河南省科技攻关(242102110019)；国家自然科学基金(31972672)

本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)S1蛋白的C端结合域(S1-CTD)，并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体，为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采用大肠杆菌原核表达系统，将PEDV-S1-CTD质粒与带有麦芽糖结合蛋白(MBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、反转录终止因子(NusA)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)四种促溶标签的原核表达载体pET21b连接，构建重组质粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1，将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21进行诱导表达，选择可溶性好且表达量高的rMBP-S1重组蛋白进行后续试验，Western blot结果显示该重组蛋白正确表达，间接免疫荧光试验(IFA)结果表明rMBP-S1能与细胞表面受体结合。随后经磁珠法筛选得到111条靶向rMBP-S1重组蛋白的候选DNA适配体，其中Apt-S1-3、Apt-S1-11富集程度最高，分别是18%和16.2%，酶联适配体吸附试验ELASA(enzyme-linked aptamer sorbent assays, ELASA)测定适配体Apt-S1-3的解离常数为2.09 nmol，并且该适配体不与rMBP蛋白、rMBP-gD蛋白、rMBP-GP5蛋白以及BSA蛋白发生交叉反应，表明该适配体具有高亲和力与高特异性。此外，使用在线软件Mfold分析适配体Apt-S1-3形成的二级结构，并且通过分子对接模拟，发现该适配体能够与靶标蛋白形成稳定的复合物。最后的间接免疫荧光试验表明适配体Apt-S1-3能够识别PEDV，流式细胞术试验证实该适配体能够抑制PEDV感染宿主细胞。本研究筛选得到的DNA适配体能够与猪流行性腹泻病毒S1-CTD蛋白高亲和力、高特异性结合，而且能够抑制猪流行性腹泻病毒感染细胞，为PEDV的靶向治疗和检测方法开发奠定基础。

来源：2025年第2期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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