畜牧兽医学报

作者：蔡云凤, 李宏, 黄小铭, 何庆, 丁振宇, 余婉婷, 罗施乐, 陈方志, 王乃东, 杨毅, 湛洋

单位：1. 湖南农业大学动物医学院, 长沙 410128；2. 兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室, 长沙 410128；3. 江西农业大学动物科学技术学院, 南昌 330045；4. 湖南派智生物科技有限公司, 长沙 410205；5. 宁乡市动物疫病预防控制中心, 长沙 410600

关键词：猪圆环病毒2型,病毒样颗粒,三倍轴区域,外源表位

基金：国家自然科学基金项目(32202790)；湖南省自然科学基金项目(2022JJ40183)；湖南省技术攻关“揭榜挂帅”项目(2021NK1030)；湖南省青年科技人才项目(2022RC1046)；湖南省教育厅科学研究重点项目(23A0194)

为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力，本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示，分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在大肠杆菌表达系统中所表达的突变体蛋白的可溶性和纯化难易程度，确定合适的外源表位嵌合区。将嵌合PPV抗原表位的Cap蛋白经体外组装获得重组的病毒样颗粒，将此病毒样颗粒免疫小鼠，通过抗体检测来评价其免疫原性。结果显示，PCV2核衣壳表面三倍轴区域存在两个适合用于展示外源表位的氨基酸区域(分别命名为Motif A和Motif B)；相同表达条件下，Motif A区域的突变蛋白均以可溶性表达为主，且能一步纯化获得目的蛋白，而Motif B区域的突变蛋白多以包涵体形式存在；Motif A区域嵌合PPV表位后，纯化的重组蛋白能在体外组装成cVLPs，并通过间接免疫荧光试验证明其保留有野生型VLPs内化PK15细胞的能力；形成的cVLPs能刺激小鼠机体产生分别针对PCV2 VLPs、B5-E1表位和PPV VP2蛋白的抗体。综上表明，PCV2 Cap蛋白Loop GH区域Motif A能够将外源表位展示在病毒样颗粒外表面，并且能够被机体免疫细胞识别产生特异性抗体。

来源：2025年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

查看畜牧兽医学报杂志2025年第1期