畜牧兽医学报

作者：曾苗苗, 杨小曼, 张鑫, 刘大凯, 时洪艳, 张记宇, 张燎原, 陈建飞, 冯廷帅, 李修文, 石达, 冯力

单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 动物疫病防控全国重点实验室/猪消化道传染病创新团队, 哈尔滨 150069

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV),N蛋白,原核表达,间接ELISA

基金：国家自然科学基金区域创新发展联合基金(U23A20236)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302022015)

为建立一种猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)血清抗体的快速检测方法，本研究首先经PCR扩增SADS-CoV N基因，纯化鉴定后克隆至表达载体pET-32a(+)，构建重组质粒pET-32a-N。重组N蛋白诱导表达并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后，采用纯化的重组N蛋白作为包被抗原，以兔抗猪HRP- IgG作为二抗，利用方阵滴定法优化各反应条件，建立了一种以SADS-CoV N蛋白为靶标的检测SADS-CoV血清抗体的间接ELISA方法，并对此方法的敏感性、特异性、重复性及临床应用价值进行鉴定。SDS-PAGE及Western blot结果显示，重组表达的N蛋白约为70 ku，且具有良好的反应原性。采用该方法检测SADS-CoV阳性血清抗体效价可达1∶3 200，并且与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒(PCV)阳性血清均无交叉反应，具有良好的敏感性和特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，具有较好的重复性。利用该方法和间接免疫荧光方法(IFA)分别对50份猪临床血清样品进行检测，结果显示二者的总符合率为98%。综上，本研究建立了一种基于SADS-CoV N蛋白的间接ELISA抗体检测方法，可用于临床SADS-CoV血清抗体检测以及流行病学的监测，对防控SADS-CoV的流行具有重要意义。

来源：2025年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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