畜牧兽医学报

作者：金聪俐, 贾琼, 任泓睿, 迟志端, 白瑞, 郭湘, 范瑞文, HerridMuren

单位：1. 山西农业大学 动物医学学院, 晋中 030801；2. 草原和牛投资有限公司, 呼和浩特 011500；3. 山西白求恩医院, 太原 030000

关键词：Qa-1b,NKG2A,纳米抗体,皮肤免疫,黑素瘤,B16细胞,蒙古牛

基金：内蒙古自治区“揭榜挂帅”项目(2022JBGS0023)；山西省自然科学基金(202203021222348)

本研究旨在通过检测蒙古牛皮肤Qa-1b/NKG2A的表达特征，分析其参与皮肤免疫的功能，及Qa-1b在抗黑素瘤发展中可能发挥的作用。通过实时定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法以及免疫共沉淀法对Qa-1b/NKG2A在皮肤中的表达进行相对定量和定位以及互作关系分析；以Qa-1b多肽为抗原，使用噬菌体展示技术，从羊驼黑色素瘤细胞纳米抗体文库中进行淘筛，获得结合性较强的纳米抗体(Qa-1b-VHH)序列；构建pET28a-Qa-1b-VHH原核表达重组质粒，通过IPTG诱导表达和镍柱纯化，获得Qa-1b纳米抗体。经ELISA检测Qa-1b纳米抗体与抗原的特异性后，将Qa-1b纳米抗体应用于Western blot和免疫组织化学方法检测组织中Qa-1b的表达，以及添加到B16黑素瘤细胞培养基中，通过CCK8法、细胞划痕法和Western blot法检测其对B16细胞增殖及迁移的影响以及与增殖和迁移相关蛋白表达情况。结果显示：Qa-1b和NKG2A在蒙古牛皮肤组织的毛囊外根鞘和血管内皮中表达，在犊牛皮肤中的表达量显著高于成年牛(P＜0.01或P＜0.001)。且Qa-1b和NKG2A在皮肤中存在互作关系。所获得的Qa-1b纳米抗体特异性较强，可用作Western blot和免疫组织化学中的一抗检测其他组织中Qa-1b的表达；Qa-1b纳米抗体添加到B16细胞培养基中，应用CCK 8法和细胞划痕法检测该Qa-1b纳米抗体对B16细胞增殖和迁移有明显的抑制效果，细胞增殖过程中Ras、MEK1、CyclinD1、CDK4蛋白的表达显著下调(P＜0.01或P＜0.001)。本试验揭示了Qa-1b/NKG2A参与皮肤免疫以保证毛囊正常生长，尤其是犊牛；Qa-1b纳米抗体可抑制B16细胞增殖和迁移，为增强皮肤免疫及抗黑素瘤发展的抗体药物提供理论依据。

来源：2025年第1期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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