畜牧兽医学报

作者：刘伟姣, 何庆, 蒋一凡, 曹思雨, 张时瑞, 吕佳璐, 龙娉, 杨凌宸, 周川, 王乃东

单位：1. 湖南农业大学动物医学院 兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室 兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心, 长沙 410128；2. 湖南农业大学动物医学院, 长沙 410128

关键词：PCV2,Capsid,Lck,SH3结构域,病毒复制

基金：湖南省自然科学基金面上项目(2022JJ30298);湖南省技术攻关“揭榜挂帅”项目(2021NK1030);湖南省大学生创新创业训练计划一般项目(S202310537036)

为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子，本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶Lck表达及活性对PCV2感染复制的影响，确定Lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先，本研究基于猪Lck结构特性和序列保守性分析，选取Lck SH3结构域为免疫原基因序列，利用原核表达目的蛋白制备小鼠抗猪Lck的多克隆抗体。然后，通过Western blot检测PCV2感染PK-15和3D4/21细胞后对Lck表达及活性的影响。最后，在PK-15细胞中利用瞬时转染过表达或Lck特异性抑制剂(A770041)，通过Western blot和荧光定量PCR(RT-qPCR)检测猪Lck表达和磷酸化对PCV2复制的影响。结果显示，成功制备了鼠源性抗猪Lck的多克隆抗体。在PCV2感染PK-15和3D4/21细胞早期阶段，Lck表达水平未见明显变化，但Lck磷酸化水平显著上调。过表达Lck可显著上调PCV2 Cap蛋白表达及病毒拷贝数，而采用A770041抑制Lck磷酸化水平后，可显著下调PCV2 Cap蛋白表达、病毒拷贝数和病毒滴度，这些结果表明Lck正调控PCV2的感染复制，为发现PCV2感染的新分子机制奠定重要基础。

来源：2024年第12期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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