畜牧兽医学报

作者：尤婷, 任善会, 王萌, 张红强, 高小龙, 姚威, 王卉, 杨雪, 马春玲, 柳民意, 张玉哲, 王金龙, 孙跃峰, 陈豪泰, 王桂荣

单位：1. 甘肃农业大学, 兰州 730070；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730016；3. 青海大学动物科技学院, 西宁 810003；4. 重庆市万州区畜牧产业发展中心, 重庆 400000

关键词：羊口疮病毒,ORF112基因,同源重组,基因缺失

基金：国家自然科学基金(32302850);甘肃省科技计划项目(22JR5RA035);甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001);中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021008)

利用同源重组技术构建羊口疮病毒(orf virus, ORFV)ORF112基因缺失毒株，为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因，通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达框，进行融合后与pUC19T载体连接，构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体。将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组。采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法，筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株，并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究。结果显示：利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法，进行阳性重组病毒纯化，通过PCR验证和测序，成功地获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株。该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象。该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致。成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株，该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力，为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株。

来源：2024年第11期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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