畜牧兽医学报

作者：张玉哲, 任善会, 姚威, 龚真莉, 张红强, 柳民意, 尤婷, 王相伟, 李积雲, 殷相平, 孙跃峰, 陈豪泰, 万学瑞

单位：1. 甘肃农业大学, 兰州 730070；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730046；3. 重庆市万州区畜牧产业发展中心, 重庆 400000；4. 青海省科学技术信息研究所, 西宁 810003

关键词：牛结节性皮肤病病毒,TK基因,Cre/LoxP系统,重组毒株

基金：国家自然科学基金(32302850);甘肃省科技计划资助(22JR5RA035);甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001);中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021008)

利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台，构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)缺失TK基因毒株，为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因，利用Cre-LoxP系统平台，红色荧光蛋白(RFP)为筛选标记，采用重叠PCR方法扩增左、右同源臂以及RFP基因表达框并进行融合，将其克隆至pUC19T载体，构建基因缺失转移载体pUC19T-LSDV-ΔTK-RFP。将转移载体重组质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，构建LSDV-ΔTK-RFP重组病毒。采取蚀斑法、有限稀释法纯化LSDV-ΔTK-RFP。然后，利用Cre-LoxP系统，在MDBK-Cre细胞中从病毒基因组中切除RFP标签，采取蚀斑法和有限稀释法筛选并纯化LSDV-ΔTK毒株。利用PCR及测序方法对重组毒株进行鉴定，并测定其一步生长曲线。结果表明成功构建缺失TK基因的重组毒株(LSDV-ΔTK)，重组毒株复制力略低于野生毒株。应用Cre-LoxP系统构建的缺失TK基因LSDV毒株，具有良好的遗传稳定性和复制生长特性，为后续LSDV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株，同时拓展了Cre-LoxP系统的应用范围。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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