畜牧兽医学报

作者：王芳萍, 任善会, 郜晓虹, 杨雪, 李积雲, 王相伟, 殷相平, 孙跃峰, 陈豪泰, 万学瑞

单位：1. 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 730070；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州 730046；3. 青海省科学技术信息研究所, 西宁 810003

关键词：牛结节性皮肤病病毒,ORF123基因,增殖能力,同源重组,重组病毒

基金：国家自然科学基金(32302850);甘肃省科技计划资助(22JR5RA035);甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001);中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021008)

旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP基因表达框，克隆至pUC-19T载体，构建基因缺失转移载体pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒。然后将pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，利用蚀斑、梯度稀释和挑取绿色荧光单克隆细胞筛选纯化重组毒株，并鉴定其遗传稳定性和增殖能力。结果显示，利用EGFP筛选标记，通过多次挑斑筛选纯化获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP。该重组病毒至少在8代细胞传代中能稳定表达绿色荧光蛋白，接种MDBK细胞后绘制一步增殖曲线表明该重组病毒滴度略低于亲本毒株。本研究成功获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP，为LSDV ORF123蛋白生物学功能研究以及减毒活疫苗的研制奠定基础。

来源：2024年第10期

《畜牧兽医学报》期刊编辑部

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